高效液相色谱-质谱联用技术同时测定人体尿液中11种代谢物.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2015年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistryDOI：10．11895／j．issn．02530820．140502高效液相色谱一质谱联用技术同时测定人体尿液中11种代谢物王磊君李钢郑赛晶费婷刘鸿戚大伟(上海烟草集团有限责任公司，上海200082)摘要采用高效液相色谱一质谱联用技术定量检测人体尿样中丙烯醛、苯、1，3-丁二烯、苯乙烯、巴豆醛的巯基尿酸类代谢物及氰化氢代谢物。将解冻后的尿样经高速离心后，取100上清液，加入50内

2、标溶液及850水后上样分析。色谱分析采用XSELECTHSS，I3c8色谱柱(150mmx2．1mmi．d，2．5m)，以乙腈一15mmol醋酸铵溶液梯度洗脱，流速250~L／min，柱温40℃，在多反应监测模式(MRM)下采用负离子扫描模式进行定量分析。本方法共检测了l6名吸烟者和6名非吸烟者的尿样，发现日吸烟量大于25支的吸烟者尿样中的烟气成分代谢物浓度高于非吸烟者。关键词高效液相色谱一质谱联用技术；尿液；代谢物1引言卷烟燃烧会产生大量的挥发性有机化合物(VOCs)，其中就包括丙烯醛、苯、1，3一丁二烯、氰化氢、苯

3、乙烯、巴豆醛等，这些挥发性有机物具有较强的致癌或致突变作用J，吸人后会对人体的代谢物产生影响。有些代谢物是吸人卷烟烟气后由烟气成分代谢产生的，称为外源性代谢物；有些则是人体本来就存在的代谢物，只是因为吸烟导致其含量变化，称为内源性代谢物。随着吸烟与健康这一话题的日渐升温，急需建立一种方便可靠的VOCs暴露量评价方法，直接针对代谢物进行分析。目前，通常采取检测呼出气体、血液及尿液中VOCs代谢物的含量评价VOCs的接触水平。其中检测尿样中VOCs的代谢物对人体的侵人性低，且取样方便，同时尿液中的代谢物相对于血液中母体化合

4、物生物半衰期更长、更稳定，所以目前检测尿液中的代谢物逐渐代替了其它评价方法。已有一些文献报道测定这些有害气体在尿液中的代谢物，包括苯的代谢物苯巯基尿酸(S—PMA)、1，3一丁二烯的代谢物Ⅳ一乙酰基，S．(3，4一二羟基丁基)一L一半胱氨酸(DH~MA)等，主要是针对一些特定的职业环境进行的研究，只能评价个别VOCs的影响，而对于烟气这种含有多种VOCs的复杂体系，同时测定多种VOCs代谢物的分析方法鲜有报道。本研究建立了同时测定11种代谢物的分析方法，评价烟气中氰化氢、苯乙烯、巴豆醛、苯、1，3一丁二烯对于人体的接触

5、水平。本方法前处理简单，适合高通量分析，特别适合烟气中VOCs代谢物研究。2实验部分2．1仪器与试剂1200液相色谱仪，配有G1329A自动进样器、G1311A四元混合泵以及G1316A柱温箱(美国安捷伦公司)；Eppendorf5810R高速离心机(德国Eppendorf公司)；API4000三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)和Analyst1．6软件数据处理系统(美国应用生物系统公司)。乙腈、甲醇(质谱级，德国默克公司)；醋酸铵(色谱纯，德国默克公司)；代谢物标样及其内标(详见表1)，其中MHBMA一1

6、和MH—BMA-2为1：1混合物，实验结果以两种物质的总量计(纯度均>99％，加拿大多伦多化学试剂公司)；Milli—QIntergral纯水／超纯水一体化系统(德国MerckMillipore公司)。2．2标样与尿样样品准备用甲醇将各同位素内标配制成1g／L的工作液。采用流动相将11种待测物的标准品配制成质量2014~6-11收稿；2014~9-12接受}E-mail：ligang@sh．tobacco．tom．cn分析化学第43卷表111种代谢物及其简称rable1l1Metabolitesanditscommon

7、la．me浓度分别为2．5，5，10，25，50，100，500和1000g／L混合标准溶液，进行LC—MS／MS分析。取志愿者24h尿液样品冷冻1h后置于离心机中，以5000r／min离心2min。除去蛋白后，取上清液过0．22m水相膜。取清液100IxL加5O内标与850txL水后上样分析。2．3液相色谱及质谱条件液相色谱条件：色谱柱XSELECTHSST3C色谱柱(150mmx2．1mmi．d，2．5m，美国Waters公司)；流动相：A为15mmol／L醋酸铵溶液，B为乙腈；流速：0．25mL／min；梯度洗脱

8、程序：0～2min，97％A；2～4min，97％～5％A；4～10min，5％～10％A；10～10．5min，10％～5O％A；10．5～l2．5min，50％A；12．5～13min，50％～3％A；13—20min，3％A。质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，负离子扫描方式，多反应检测(MRM)模式；喷雾(IS)电压为：--