贵州天麻主产区蜜环菌的分离及rDNA-ITS序列分析.pdf

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1、第39卷第6期西南师范大学学报(自然科学版)2014年6月Vo1．39No．6JournalofSouthwestChinaNormalUniversity(NaturalScienceEdition)Jun．2014贵州天麻主产区蜜环菌的分离及rDNA—ITS序列分析①黄万兵，桂阳2,3，朱国胜，刘朝贵，李青风，s1．西南大学园艺园林学院，重庆400715；2．贵州省现代中药材研究所，贵阳550006；3．贵州省农业生物技术重点实验室，贵阳550006摘要：[目的]了解贵州天麻主产区蜜环菌的生物种及其地理分布．[方法]在代表性主产区采集

2、蜜环菌样本，利用双抗培养基分离菌索或子实体；从液体培养的菌丝中提取总DNA，利用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增rDNA-ITS片段，扩增产物进行TA克隆并送测序；利用SeqMan软件对序列进行拼接，并用MEGA软件构建进化树．[结果]从大方、德江等县分离到35株蜜环菌；得到DF1等17个菌株的rDNA-ITS完整序列，GenBank中蜜环菌rDNA—ITS序列比对鉴定与系统发育分析一致．[结论]17个rDNITs序列分析的蜜环菌株中，4株属于生物种Armillariagallica；8株属于Armillariacepistipes；5

3、株与Armillariamellea亲缘关系较近，可能为其同源种．贵州省内A．mellea，A．cepistipes的分布最广，其次是A．gallica．关键词：蜜环菌；分离；生物种；rDNA—ITS中图分类号：Q939文献标志码：A文章编号：1000—5471(2014)6—0035一O8蜜环菌系伞菌目、口蘑科、蜜环菌属的一种兼性寄生性真菌，广泛分布于世界各地u]．自1790年由Vahl鉴定该种后，国外最早报道蜜环菌可引起多种针叶树和阔叶树根腐病，其寄主植物达300属．作为一种重要的森林病原菌，国内外对其致病机理研究较多

4、2]．蜜环菌有

5、清目、利肺、益肠胃、抗痉挛、镇静、扩张血管、降血压等药理作用，子实体、菌丝、菌索都可以入药，是一类具有重要经济价值的高等真菌[4；名贵中药天麻和猪苓必须依靠蜜环菌侵染提供营养才能生长繁殖]．蜜环菌的致病性与特殊性使蜜环菌的研究一直是世界范围内的研究热点，尤其是百多年来对其分类的研究．自1819年Fries建立Armillarilla族至今，基于形态学的蜜环菌属分类一直比较混乱，全世界有250多个种划分该属，曾经属于蜜环菌的现代伞菌属多达44个，但是一些应该是蜜环菌属的真菌被分到其他属中[．Hintikka(1973)发现蜜环菌的四极性异宗

6、配合机制和单双倍体的菌落形态差异后，使得能够利用交配实验进行生物种的鉴定．KarlKohorhen(1978)和Anderson&Ullrich(1979)等分别利用单倍体交配方法发现了欧洲和北美的蜜环菌互交不育群即生物种．此后，互交不育性实验成为鉴定生物种和划分不同未知菌株到生物种的通用方法．此法虽然准确度高，但是蜜环菌子实体和单核菌丝的获得难度大、周期长．分子标记作为系统发生和遗传多样性研究的重要手段，也使快速鉴定蜜环菌生物种成为可能．rDNA—ITS分子标记就曾多次成功地被运用到蜜环菌遗传多样性分析中．Anderson和Stasov

7、ski(1992)等通过rD一①收稿日期：2013一O7～01基金项目：贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金项目[黔科合人字(2011)353；贵州省科技计划项目[黔科合院所创能(2010)40023；中央补助地方科技基础条件专项基金项目[黔科条中补地(2010)4002]；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目[黔科合中药字(2011)50353；贵州省农业科学院研究生创新基金项目[黔农科合(创新基金)2011016]；贵州省农业科学院专项资金项目[黔农科院院专项(2012)0203．作者简介：黄万兵(1988一)，男，湖北荆州人，

8、硕士研究生，主要从事应用微生物的研究．36西南师范大学学报(自然科学版)http：／／xbbjb．SWU．cn第39卷NA—ITS确定A．mellea，A．tabescens与A．sinapina，A．calvescens，A．gallica，A．cepistipes明显不是一个系统发育系l_8]．Chillali等(1998)用欧洲菌株研究表明，ITS序列也可以用来进行蜜环菌种间的系统发育关系研究j．Coetzee等(2000)对全球的A．mellea进行了IGS和ITS的DNA序列分析，并指出在ITS序列上，亚洲群体与西北美的系统发育

9、关系比较近，欧洲的A．mellea与亚洲和北美的关系比较远[】。。．目前全世界通过互交不育性实验已鉴定蜜环菌生物种多达30种，我国鉴定的蜜环菌生物种有14种l_】，主要分布在东北、华中、西南地