WI-03-34金黄色葡萄球菌的试验方法.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-34版号A.0金黄色葡萄球菌的测定方法页次1/2生效日期2020/01/021．目的制订金黄色葡萄球菌的测定方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按测定方法操作。2．适用范围:本方法适用于金黄色葡萄球菌的测定。3.职责质检部对本测定方法实施负责。4.程序4.1仪器电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化培养箱、显微镜4.2器具烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、

2、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）4.3培养基、菌种：SCDLP培养液、琼血脂培养基、甘露醇培养液、兔血浆、染色液（革兰氏染色用）4.4器具灭菌：样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。4.5操作步骤5操作步骤取样上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在琼血脂培养基上，置35℃±2℃培养24～48h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光

3、滑，周围有溶血圈。　　挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞.取样液5mL，加入到50mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±2℃培养24h。　　精简是否有自荚膜。若符合上述情况，应进行下列试验：　　甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置35℃±2℃培养24h，发酵恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-34版号A.0金黄色葡萄球菌的测定方法页次2/2生效日期2020/01/02甘露醇产酸者为阳性。血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一

4、端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验；试管法：吸取1∶4新鲜血浆0.5mL，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养物0.5mL。混匀，放35℃±2℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5mL作阳性与阴性对照。6结果报告凡在琼脂平板上有可疑菌落

5、生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。，7．记录保存：7.1．品管部保管5年。8．相关操作规程9.1．电热鼓风干燥箱操作规程9.2．HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程9.3．生化培养箱操作规程9.4．YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程9.5．净化工作台操作规程10．相关记录11.1.生物性能检测记录。编制：日期：审核：日期：批准：日期：