杜仲MEP途径系列基因表达差异的研究.pdf

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第34卷第2期中南林业科技大学学报、b1．34No．22014年2月JournalofCentralSouthUniversityofForestry&TechnologyFeb．2014杜仲MEP途径系列基因表达差异的研究刘慧敏la,lb)乌云塔娜，王淋la,lb)许靖诗la,lb)叶生晶h(1．中南林业科技大学a．经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室；b．林学院，湖南长沙410004；2．中国林业科学研究院经济林研究开发中心，河南郑州450003)摘要：以杜仲果实和叶片转录组为基础，研究了MEP途径系列基因的表达差异，为杜仲基因的克隆、功能鉴定及重要成分的分子积累机理研究提供重要的依据。结果表明，杜仲转录组中共42条Unigene被MEP途径注释。DXS的DXS2和DXS3在幼果和叶片中表达量具有显著差异，且DXS2在幼果和叶片中的表达量最高；该酶在幼果和成熟果实中有7条Unigene被注释，其中DXS6在成熟果实中特异表达，的表达量具有显著差异。DXR在幼果和叶片中有4条Unigene被注释，其中DXR1、DXR2、DXR3的表达量具有显著差异；该酶在幼果和成熟果实中有3条Unigene被注释，其中DXR3在成熟果实中特异表达，3条Unigene的表达量均无显著差异，DXR1在幼果和成熟果实中表达量均最高。MCT在幼果和叶片中仅1条被注释，表达量差异显著；该酶在幼果和成熟果实中仅1条被注释，其表达量无显著差异。CMK在幼果和叶片中仅CMK1被注释，且表达量无显著差异；该酶在幼和成熟果实中仅CMK1被注释，且表达量无显著差异。MDS在幼果和叶片中仅MDS1被注释，其表达量差异显著；该酶在幼果和成熟果实中有2条Unigene被注释，且表达量无显著差异。HDS在幼果和叶片中仅HDS1被注释，表达量具有显著差异；该酶在幼果和成熟果实中仅HDS1被注释，表达量有显著差异。HDR在幼果和叶片中有5条Unigene被注释，其中HDR1和HDR5的表达量具有显著差异；该酶在幼果和成熟果实中有7条Unigene被注释，其中HDR3、HDR4、HDR5、HDR6的表达量有显著差异。IPI在幼果和叶片中仅IPI1被注释，其表达量无显著差异；该酶在幼果和成熟果实中有2条Unigene被注释，其中IPI1的表达量有显著差异。关键词：杜仲，幼果，叶片，成熟果实，基因表达量分析中图分类号：$727_3；$603．2文献标志码：A文章编号：1673—923X(2014)02．0026．08ExpressiondifferencesofseveralgenesinEucommiaMEPpathwayLIUHui-min'，WUYUNTana2，WANGLin，，XUJing．shi'，YESheng~ing(1．CentralSouthUniversityofForestryandTechnology,a．KeyLaboratoryofCultivationandProtectionforNon—WoodForestTrees，MinistryofEducation；b．SchoolofForestry,Changsha410004，Hunan，China；2．Non—timberResearchandDevelopmentCenterofCAF,Zhengzhou450003，Henan，China)Abstract：BasedonthetranscriptomeofEucommiafruitsandleaves，theexpressiondiferencesofseveralgenesinMEPpathway,thusofferinganimportantbasisforgeneclone，functionidentification，molecularaccumulationmechanismofimportantcomponent．Theresultsshowthat42UnigenewereannotatedbyMEPpathway,ofthem，theexpressionofDXS2andDXS3weresignificantlydiferentbetweenyoungfruitandleaf,andtheexpressionofDXS2wasthehighest；7UnigenesofDXSwereannotatedinyoungfruitandmaturefruit．，ofthem，DXS6onlywasexpressedinfruitandtheexpressionsofDXS2，DXS3，DXS5andDXS7werewithsignificantdiferences．4UnigenesofDXRwereanotatedinyoungfruitandleaf．TheexpressionofDXR1、DXR2、DXR3weresignificantlydifferent．3Unigeneswereannotatedinyoungfruitandfruit．DXR3onlyexpressedinfruit．ExpressionofallUnigeneswerenotsignificantlydiferent．ExpressionofDXR1washighest．Only1UnigeneofMCTwasannotatedinyoungfruitandleafandit’sexpressionwassignificantlydiferent．Only1Unigenewasannotatedinyoungfruitandfruitandit’sexpressionwasnotsignificantlydiferent．Only1UnigeneofCMKwasannotatedinyoungfruitandleafandit’sexpressionwasnotsignificantlydiferent．Only1Unigenewasannotatedinyoungfruitandfruitandit’sexpressionwasnotsignificantlydiferent．Only1UnigeneofMDSwasannotatedinyoungfruitandleafandit'sexpressionwassignificantlydiferent．2Unigeneswereanotatedinyoungfruitandfruitandit'sexpressionwasnotsignificantlydiferent．Only1UnigeneofHDSwasannotatedinyoungfruitandleafandit’sexpressionwassignificantlydiferent．Only1Unigenewasannotatedinyoungfruitandfruitandit’sexpressionwassignificantlydiferent．5UnigenesofHDRwereannotatedinyoungfruitandleaf．ExpressionofHDRlandHDR5weresignificantlydiferent．While7Unigeneswereannotatedinyoungfruitand收稿日期：2O13．04．12基金项目：林业公益性行业科研专项“杜仲育种群体建立与综合利用技术研究”(201004029)作者简介：刘慧敏(1989．)，女，河南辉县人，硕士研究生，研究方向为林业生物技术通讯作者：乌云塔娜(1975-)，女，内蒙古通辽人，博士，教授，主要从事经济林育种与栽培的研究：E—mail：tanatana@sina．corn 第34卷中南林业科技大学学报27fruit．ExpressionofHDR3、HDR4、HDR5、HDR6weresignificantlydiferent．Only1UnigeneofIP1wasannotatedinyoungfruitandleafandit'sexpressionwasnotsignificantlydiferent．While2Unigeneswereannotatedinyoungfruitandfruit．ExpressionofIPI1wassignificantlydiferent．Keywords：Eucommia；youngfruit；leaf；fruit；geneexpressionanalysis杜仲Eucommiaulmoides为杜仲科杜仲属多年(DXR)的作用发生分子重排并进行氧化还原反生落叶乔木，杜仲科仅1属1种，中国是现存杜应生成MEP，MEP再经过2一甲基一D一赤藓醇．4．仲的唯一原产地[1-2]有学者在北美发现了杜仲的磷酸胞苷酰转移酶(MCT)的作用生成4一(5’．化石『3]，来自美国、加拿大和墨西哥的杜仲的25焦磷酸胞苷)2-C一甲基．D一赤藓醇(CDP—ME)，个生长地的植物残骸表明该物种曾经在新生代广接着经过4一(5’．焦磷酸胞苷)．2-C一甲基一D一赤泛分布与北美的各个地方。杜仲是中国特有的名藓醇激酶(CMK)的磷酸化后生成4一(5’．焦贵经济树种，也是世界适应范围最广的重要胶源磷酸胞苷)一2一C一甲基一D一赤藓醇．2一磷酸(CDP．植物【4]。杜仲以干燥的根皮入药，具有补肝肾、强MEP)，然后经过2一甲基．D一赤藓醇．2，4一环筋骨、降血压、安胎等诸多功效，用于治疗肾虚焦磷酸合酶(MDS)的作用生成2一甲基一D一赤藓腰疼、筋骨无力、妊娠漏血、胎动不安等多种疾醇一2，4一环焦磷酸(MEcPP)，接着又在1一羟基病]。JinNyoungHO【6等人于2005年的研究了从一2一甲基一2一E一丁烯基一4一焦磷酸合酶(HDS)的作杜仲中提取的桃叶珊瑚苷在紫外线．B(UVB)诱用下生成1一羟基．2．甲基一2一E一丁烯基一4一焦磷酸导的人类成纤维细胞的氧化应激反应中所起到的(HMBPP)，最后在1．羟基一2．甲基一2一E一丁烯保护作用，研究发现经过UVB的照射后，用桃叶酸一4．焦磷酸还原酶(HDR)催化下形成IPP。IPP珊瑚苷预处理的人体皮肤成纤维细胞(Hs68株系)，不能离子化，经过异戊烯基焦磷酸异构酶(IPI)能够明显抑制57％的基质金属蛋白酶一1(MMP．的作用，部分转化为双键异构体二甲基丙烯基焦I)的产生。杜仲胶是世界极具发展潜力的优质天磷酸(DMAPP)，并处于一定的化学平衡状态。然橡胶资源，ShinyaTakeno[_等人于2008年利用IPP和DMAPP这两个化合物被更广泛地认为是自傅里叶变换红外光谱和裂解气象色谱／质谱来定然界中构建所有萜类化合物的基本单元[】”。随着量分析了杜仲中的反式一1，4．聚异戊二烯，并成大家对植物MEP途径研究的深入，人们越来越多功地将提取／定量的方法应用于研究杜仲橡胶含的了解到多种植物的MEP途径的关键酶及调节因量和分子量的季节性变化，FT-IR分析表明叶子中素。金蓉[1等于2007年研究了1一脱氧木酮糖一5一的杜仲胶随着季节的变化是逐渐积累的过程，从磷酸合酶(DXS)及其编码基因，研究表明DXSSEC分析得到的数据看来随着季节变化低分子量是由一到多个基因编码，因生物种类而异，根据的橡胶(Mn=6．0×10)所占的比重呈增加趋势。同源性，植物的DXS基因可分成两类。AdhikariNobuakiSuzuki【8等人于2012年构建并分析了反式MeghaNath列于2010年研究了阳春砂HMGR，聚异戊二烯树种杜仲EST文库，该研究构建了一DXS和DXR基因表达及功能分析，研究表明3个个杜仲茎外周组织与内周组织的cDNA文库，包基因在根、茎、果皮和种子团中的表达量均高于含27752个表达序列标签(ESTs)，组装成10520叶片，DXS在根、茎、叶、果皮和种子团中均有个分别由4302个重叠群和6218个单序列组成的高表达。2012年刘攀峰[】】对杜仲MEP途径系列Unigene，分离出与胶乳高分子量聚异戊二烯合成基因全程cDNA分离鉴定及序列特征进行了详细相关的橡胶颗粒膜蛋白同源基因以及一些重要的研究，首次从杜仲叶片中分离和鉴定出MEP途径橡胶蛋白编码基因(MLPs)，为杜仲胶生物合成的系列酶基因，得到了4个限速酶基因和4个相的深入研究奠定了基础。李铁柱等于2012年研究关酶基因cDNA全长，确定了DXR等l0个基因了杜仲果实和叶片以及幼果和成熟果实。转录推导氨基酸序列的理化性质，一级结构和功能区组数据组装及基因功能注释。域，并预测了这1O个基因编码蛋白的二级结构特植物的MEP途径是丙酮酸和3一磷酸甘油醛点，包括包括cc．螺旋、B一折叠和螺环结构的比值在1一脱氧．D一木酮糖．5一磷酸合成酶(DXS)的及结构类型，应用同源建模法预测了这10个基因催化下生成1．脱氧一D一木酮糖一5一磷酸(DXP)，的三级结构特点，包括亚单位组成、活性区、功DXP经1一脱氧一D一木酮糖．5一磷酸还原异构酶能域等一系列结论，为深入研究各相关酶在杜仲 28刘慧敏，等：杜仲MEP途径系列基因表达差异的研究第2期萜类合成中所发挥的功能提供了一定参考。的“几种提取杜仲RNA方法的比较”。1材料与方法1_3杜仲幼果、叶片和成熟果实的转录组测序转录组的测序工作委托深圳华大基因完成。1．1植物材料1．4杜仲幼果、叶片和成熟果实转录组数据组装分别于杜仲幼果时期(5月28日)，在国家及基因功能注释技术路线林业局泡桐研究中心采集‘华仲6号’杜仲幼果和叶片，成熟果时期(同年10月28日)，采集其本次研究对杜仲幼果、叶片和成熟果实合成熟果实为材料。成调控时期的转录组进行测序，并对数据库中Unigene进行了全面分析和注释。具体流程图如图1．2杜仲幼果、叶片和成熟果实RNA的提取1所示。幼果、叶片和成熟果实RNA的提取参照陈建图1数字化转录组数据库的分析Fig．1Dataanalysisofdigitaltranscriptome2结果与分析释了Unigene21711；4．(5’一焦磷酸胞苷)．2-C一甲基一D一赤藓醇激酶CMK(4一diphosphocytidy1．2．在杜仲幼果、叶片和成熟果实转录组数据C—methyl-D—erythritolkinase[EC：2．7．1．148])在幼中共8个基因被KEGG数据库MEP合成途径注果和叶片中仅注释了Unigene8371，在幼和成熟果释，见图2，幼果和叶片中有19条Unigene被注实中仅注释了Unigene19234；2一甲基一D一赤藓醇释，幼果和成熟果实中有23条Unigene被注释。一2，4一环焦磷酸合酶MDS(2．C．methy1．D．erythritol其中1一脱氧．D．木酮糖．5磷酸合成酶DXS(1一2，4一cyclodiphosphatesynthase[EC：4．6．1．12])在幼deoxy—D—xylulose一5一phosphatesynthase[EC：2．2．1．7])果和叶片中仅注释了Unigene12126，在幼果和成在幼果和叶片中注释Unigene10793等5条熟果实中注释了Unigene19101等2条Unigene；Unigene，在幼果和成熟果实中注释Unigene10971一羟基一2．甲基一2一E一丁烯基一4一焦磷酸合酶HDS等7条Unigene；1．脱氧．D．木酮糖．5．磷酸还((E)-4一hydroxy一3一methylbut一2-enyl—diphosphate原异构酶DXR(1-deoxy—D—xylulose一5一phosphatesynthase[EC：1．17．7．1])在幼果和叶片中仅注释reductoisomerase[EC：1．1．1．267】)在幼果和叶片了Unigene447，在幼果和成熟果实中仅注释了中注释了Unigene22043等4条Unigene，在幼Unigene20243；1一羟基一2一甲基一2一E．丁烯基一4一果和成熟果实中注释了Unigene20455等3条焦磷酸还原酶HDR(4一hydroxy．3一methylbut一2．Unigene；2一甲基一D一赤藓醇．4一磷酸胞苷酰转enyldiphosphatereductase[EC：1．17．1．2])在幼果和移酶MCT(2-C—methyl—D—erythritol4-phosphate叶片中注释了Unigene21206等6条Unigene：异cytidylyltransferase[EC：2．7．7．60])在幼果和叶片中戊烯基焦磷酸异构酶IPI(isopenteny1．diphosphate仅注释了Unigene21890，在幼果和成熟果实中仅注 第34卷中南林业科技大学学报29delta—isomerase[EC：5．3．3．2])在幼果和叶片中仅注表2DXS在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Table2ExpressionofDXSinfruitsandyoungfruits释了Unigenel194，在幼果和成熟果实中注释了∞舳∞∞加∞∞∞∞加0Unigene18246等2条Unigene。2．11．脱氧一D一木酮糖．5。磷酸合成酶(DxS)Unigene表达量分析DXS在幼果和叶片中有5条Unigene被注释，分别是Unigene10793、13420、18207，、18209、41777，其中Unigene13420和Unigene18207的表达量具有显著差异(见表1)；Unigene13420在幼果和叶片中表达量均最高(见表1和图2)；以上5条Unigene在幼果中的表达量略高于叶片。表1DXS在杜仲幼果和叶片中的表达情况Table1ExpressionofDXSinleavesandyoungfruits图3DXS在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．3ExpressionofDXSinfruitsandyoungfruits中Unigene22043、27843、43251的表达量具有显著差异(见表3)；Unigene9422在幼果中表达量最高，Unigene22043在叶片中表达量最高(见表3和图4)；以上4条Unigene在叶片中的表达量明显高于幼果。r1l|l广_一一表3DXR在杜仲幼果和叶片中的表达情况l0793l3420I8207l82O941777Table3ExpressionofDXRinleavesandyoungfruits口幼艰叶圩图2DXS在幼果和叶片中的表达差异Fig．2ExpressionofDXSinleavesandyoungfruitsDXS在幼果和成熟果实中有7条Unigene被注释，分别是Unigene1097、21343、21521、21659、21940、62288、6352，其中Unigene62288在成熟果实中特异表达，Unigene21343、21521、21940、6352的表达量具有显著差异(见表2)；Unigene6352在幼果中表达量最高，Unigene21343在成熟果实中表达量最高(见表2和图3)；以上7条Unigene在幼果中的表达量明显高于成熟果实。2．21一脱氧一D．木酮糖．5一磷酸还原异构酶(DxR)22O43278肆34325l9422口幼果一叶片表达量分析图4DXR在杜仲幼果和叶片中的表达差异DXR在幼果和叶片中有4条Unigene被注释，Fig．4ExpressionofDXRinleavesandyoungfruits分别是Unigene22043、27843、43251、9422，其 30刘慧敏，等：杜仲MEP途径系列基因表达差异的研究第2期DXR在幼果和成熟果实中有3条Unigene被MCT在幼果和成熟果实中有l条Unigene被∞∞们如加mO注释，分别是Unigene20455、20568、53879，注释，为Unigene21711，均有表达，且表达量无其中Unigene53879在成熟果实中特异表达，3显著差异(见表6和图7)。条Unigene的表达量均无显著差异(见表4)；表6MCT在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Unigene20455在幼果和成熟果实中表达量均最高Table6ExpressionofMCTinfruitsandyoungfruits(见表4和图5)；以上3条Unigene在成熟果实中的表达量略高于幼果。表4DXR在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Table4ExpressionofDXRinfruitsandyoungfruits口幼聚■叶_l{765432●图7MCT在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异如Fig．7ExpressionofMCTinfruitsandyoungfruits2．44一(5一焦磷酸胞苷)．2一C一甲基一D．赤藓醇激酶(CMK)表达分析2O4552O56823879口幼粜■叶姥CMK在幼果和叶片中只有1条Unigene得到注释，为Unigene8371，其表达量无显著差异(见图5DXR在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．5ExpressionofDXRinfruitsandyoungfruits表7和图8)。2．32一甲基．D．赤藓醇．4．磷酸胞苷酰转移酶表7CMK在杜仲幼果和叶片中的表达情况Table7ExpressionofCMKinleavesandyoungfruits(MCT)表达分析MCT在幼果和叶片中有1条Unigene被注释，为Unigene21890，均有表达，且表达量差异显著(见表5和图6)。表5MCT在杜仲幼果和叶片中的表达情况Table5ExpressionofMCTinleavesandyoungfruits837l口幼聚一卧片图8CMK在杜仲幼果和叶片中的表达差异Fig．8ExpressionofCMKinleavesandyoungfruits在幼果和成熟果实中也只有1条Unigene得到2l89O注释，为Unigene19234，其表达量无显著差异(见口幼果一H{片表8和图9)。图6MCT在杜仲幼果和叶片中的表达差异Fig．6ExpressionofMCTinleavesandyoungfruits 第34卷中南林业科技大学学报31表8CMk在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况表10MDS在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Table8ExpressionofC”MK拍infruitsandyou舱ngfruitsTable10ExpressionofMDSinfruitsandyoungfruits2520I5lO5l3234O口幼一叶盼口幼槊●叶片图9CMK在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．9ExpressionofCMKinfruitsandyoungfruits图11MDS在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．11ExpressionofMDSinfruitsandyoungfruits2～2-~-D_赤藓醇一2，4·环焦磷酸合酶(MDs)和图表士达。分析。l⋯2)。表11HDS在杜仲幼果和叶片中的表达情况MDS在幼果和叶片中仅有1条Unigene被注Table11ExpressionofHDSinleavesandyoungfruits释，为Unigene12126，其表达量差异显著(见表9和图10)。表9MDS在杜仲幼果和叶片中的表达情况Table9ExpressionofMDSinleavesandyoungfruits706050403O口幼果一叶片2O图12HDS在杜仲幼果和叶片中的表达差异IOFig．12ExpressionofHDSinleavesandyoungfruitsOl2I26口幼粜●nD4"HDS在幼果和成熟果中有1条Unigene被注释，为Unigene20243，其表达量有显著差异(见图10MDS在杜仲幼果和叶片中的表达差异Fig．10ExpressionofMDSinleavesandyoungfruits表12和图13)。在幼果和成熟果实中有2条Unigene被注表12HDS在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Table12ExpressionofHDSinfruitsandyoungfruits释，分别是Unigene19101和Unigene54272，其中Unigene54272在成熟果实中特异表达，以上2条Unigene表达量无显著性差异(见表1O和图11)。2．61羟基一2一甲基．2一E．丁烯基。4一焦磷酸合酶(HDS)表达分析2．71一羟基．2．甲基一2一E一丁烯基．4．焦磷酸还原酶(HDR)表达分析HDS在幼果和叶片中只有1条Unigene被注释，为Unigene447，其表达量差异显著(见表11HDR在幼果和叶片中有5条Unigene被注 32刘慧敏，等：杜仲MEP途径系列基因表达差异的研究第2期250表14HDR在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况65432Table14ExpressionofHDRinfruitsandyoungfruits2OO∞∞∞∞∞∞0l5Oloo5OO20243幼粜■叶片图13HDS在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．13ExpressionofHDSinfruitsandyoungfruits释，分别为Unigene21206、27419、3128、9279、9944，其中Unigene21206和Unigene9944的表达量有显著性差异(见表13)；Unigene21206在幼果和叶片■中的表达量均为最高(见表13和图14)；整体上叶片中Unigene的表达量明显高于幼果。322ll表13HDR在杜仲幼果和叶片中的表达情况∞鲫∞∞如O口幼粜■峙盼Table13ExpressionofHDRinleavesandyoungfruits图15HDR在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异Fig．15ExpressionofHDRinfruitsandyoungfruits表15IPI在杜仲幼果~nn-t片中的表达情况Table15ExpressionoflPIinleavesandyoungfruitsl98。Ol97．5l970I965l96095+52l2O627口41幼9果312892799944一叶件l9SO口幼难■叶片图14HDR在杜仲幼果和叶片中的表达差异Fig．14ExpressionofHDRinleavesandyoungfruits图16IPI在杜仲幼果和叶片中的表达差异Fig．16ExpressionoflPIinleavesandyoungfruitsHDR在幼果和成熟果中有7条Unegene被IPI在幼果和成熟果实中有2条Unigene被注注释，分别为Uniegen11397、18350、22493、释，分别是Unigene18426和Unigene25112，其中28959、29905、30759，其中Unigene22493、Unigene18416的表达量有显著差异(见表16)。28959、29905、30759的表达量有显著差异(见表14和图15)。表16IPI在杜仲幼果和成熟果实中的表达情况Table16ExpressionofIPIinfruitsandyoungfruits2．8异戊烯基焦磷酸异构酶(IPI)表达分析IPI在幼果和叶片中Unigene仅有1条Unigene被注释，为Unigenel194，其表达量无显著差异(见表l5)。 第34卷中南林业科技大学学报33OO砌OOOO杜仲，使其在杜仲中超量表达，经与对照比较发现，转EuFPS基因的含胶细胞多于对照的含胶细胞，在电镜下，转EuFPS基因的杜仲叶片中充满了颗粒状物质，细胞结构完全退化，但这些颗粒物质在对照中没有观察到，推断出是法尼基焦磷酸合酶基因的超量表达对杜仲含胶细胞产生了影响。2012年RenChen[1印等通过过量表达来提高la84l幼6251l2EulPI的表达水平从而提高了转基因杜仲中反式聚一叶片异戊二烯的积累量，IPI催化异戊烯基二磷酸转化图17IPIe在杜仲幼果和成熟果实中的表达差异成其高度亲电的异构体．二甲基丙烯基二磷酸，这Fig．17ExpressionofIPIinfruitsandyoungfruits是包括异戊二烯在内的所有类异戊二烯的生物合3结论与讨论成的第一步，研究结果表明，IPI的表达调控是高产胶杜仲的关键靶点。综上所述，可以在本研究本研究首次比较了杜仲MEP途径的8条基因的基础上，借鉴前人的经验更加深入的地研究杜在幼果和叶片以及幼果和成熟果实的表达量，为仲MEP生物合成途径的调控[17-18]。将来从分子水平上深入研究杜仲MEP途径的调控提供了理论基础。在杜仲幼果、叶片和成熟果实参考文献：转录组数据中共8个基因被KEGG数据库MEP合[1]杜红岩．杜仲优质高产栽培【M】．北京：中国林业出版社，成途径注释，幼果和叶片中有19条Unigene被注1996．释，幼果和成熟果实中有23条Unigene被注释。[2]李芳东，杜红岩．杜仲[M]．北京：中国中医药出版社，2001．其中1。脱氧一D．木酮糖一5一磷酸合成酶在幼果和叶[3】VictorB，CallandDavidL．Dilcher．Thefossilrecordof片中有Unigene10793等5条Unigene被注释，在Eucommia(Eucommiaceae)innorthAmerica[J]．American幼果和成熟果实中有Unigene1097等7条UnigeneJournalofBotany,1997，84(6)：798_8l4．被注释；1一脱氧一D．木酮糖一5．磷酸还原异构酶在[4]纪奎江．我国橡胶资源与废橡胶循环利用[J]．技术交流，2010，幼果和叶片中有Unigene22043等4条Unigene被4：21．24．注释，在幼果和成熟果实中有Unigene20455等3[5】国家药典委员会．中华人民共和国药典一部【M】．北京：化学条Unigene被注释；2．甲基一D一赤藓醇一4一磷酸工业出版社，2005．胞苷酰转移酶在幼果和叶片中仅Unigene21890被[6】JinNyoungHO，YooHyunLEE，JongSeokPARK，eta1．注释，在幼果和成熟果实中仅Unigene21711被注ProtectiveefectsofaucubinisolatedfromEucommiaulmoides释；4一(5’一焦磷酸胞苷)一2-C．甲基一D一赤藓醇againstUVB—inducedoxidativestressinhumanskinfibroblasts激酶在幼果和叶片中仅Unigene8371被注释，在[J]．Bio1．Pharm．Bul1．，2005，28(7)：1244—1248．幼和成熟果实中仅Unigene19234被注释；2一甲【7]ShinyaTakeno，TakeshiBamba，YoshihisaNakazawa，eta1．基一D一赤藓醇一2，4．环焦磷酸合酶MDS在幼果Quantificationoftrans·1．4-polyisopreneinEucommiaulmoides和叶片中仅Unigene12126被注释，在幼果和成熟byfouriertransforminfraredspectroscopyandpyrolysis·gas果实中有Unigene19101等2条Unigene被注释；chromatography／massspectrometry．JournalofBioscienceand1．羟基．2．甲基．2一E一丁烯基．4．焦磷酸合酶在幼Bioengineering【J]．2008，105(4)：355-359．果和叶片中仅Unigene447被注释，在幼果和成熟【8]NobuakiSuzuki，HirotakaUefuji，TakashiNishikawa，et果实中仅Unigene20243被注释；1一羟基．2一甲基a1．ConstructionandanalysisofESTlibrariesofthetrans·一2一E一丁烯基．4．焦磷酸还原酶在幼果和叶片中有polyisopreneproducingplant，EucommiaulmoidesOliver．Unigene21206等6条Unigene被注释；异戊烯基Planta[J]．D0I10．1007／s00425-012·1679-X．焦磷酸异构酶在幼果和叶片中仅Unigenel194被注[9】李铁柱，杜红岩，刘慧敏，等．杜仲果实和叶片转录组数据组释，在幼果和成熟果实中有Unigene18246等2条装及基因功能注释[J]．中南林业科技大学学报，2012，32(11)：Unigene被注释。122．130．赵丹[】5]于2009年研究了杜仲法尼基焦磷酸【10】李铁柱，杜红岩，刘慧敏，等．杜仲幼果和成熟果转录组数合成酶基因超量表达对含胶细胞的影响，通过将据组装及基因功能注释[J]．中南林业科技大学学报，2012，与杜仲胶合成相关的法尼基焦磷酸合酶基因转入32(10)：9-17．(下转第61页) 第34卷中南林业科技大学学报[[[[[12345法．河北农业大学学报，2004，27(6)：44—47．同源性分析上的应用[J]，北京农学院学报，2006，21(3)：1-4．[20】黄少勇，张智俊，罗淑萍，等．山核桃EST-SSR引物的筛选[25]秦明，刘梦培，傅大立，等华仁杏SSR标记的筛选与评价及通用性分析，经济林研究[J]，2013，31(3)：10—15．[J】l经济林研究，2013，31(3)：72．76．[21]RohlFFJ．NTSYS—pcnumericaltaxonomyandmultivariate[26]王红霞，赵书岗，高仪，等．普通核桃遗传多样性的AFLPanalysissystem[M]．version2．1．ExeterPubNewYork，2000．分析[J]，中国农业科学，2011,44(7)：1434．1442．[22]况少青，张宇舟，陈竺．基因组扫描一遗传病相关基因定位【27】庞晓明，邓秀新，胡春根．枳属36份特异种质的AFLP指纹的有力工具[J]l中华医学遗传杂志，1997，14(2)：99—103．图谱构建与分析[J]．园艺学报，2003，30(4)：394—398．【23]NeiM，LIWH．Mathematicalmodelforstudyinggenetic[28]罗正荣，李发芳，蔡礼鸿．部分中国原产甜柿种质的分子系统variationintermsofrestrictionendonucleases[J1．ProcNatlA学研究[J]l园艺学报，1999，26(5)：297—301．cadSci，1979，76(10)：5269—5273．【24]郝艳宾，肖永强，齐建勋，等，微卫星DNA在核桃属近缘种[本文编校：文凤鸣]0000，☆☆y々“，々0q0000，勺0、‘，々0，、，々0‘／，00，奇{，t，tt0☆00々々t00w々t'，‘>0々0[[[(上接第33页)678李恒．萜类化合物MEP生物合成途径中关键酶1．脱氧．D．的影响研究[D]．贵阳：贵州大学，2009．木酮糖一5．磷酸合酶和l一脱氧．D一木酮糖一5磷酸还原异构RenChen，YokoHarada，TakeshiBamba，ela1．0verexpressiOn化酶的研究[D]．西安：西北大学，2012．ofanisopentenyldiphosphateisomerasegenetoenhancefans—金蓉，朱长青，徐昌杰．1一脱氧木酮糖．5．磷酸合成酶(DXS)polyisopreneproductioninEucommiaulmoidesOliver[J]．BMC及其编码基因[J]．细胞生物学杂志，2007，29：706—712．Biotechnology．，2012，12：78．AdhikariMeghaNath．ExpressionalandfunctionalAnalysisof乌云塔娜，刘慧敏，杜红岩，等．杜仲MEP途径系列基因HMGR，DXSandDXRgenesfromAmomumvillosumLout[D]．5端非编码区的顺式作用元件预测[J]．经济林研究，2013，广州：广州中医药大学，2010．3lf41：9-15．刘攀峰．杜仲MEP途径系列基因全长cDNA分离鉴定及序刘慧敏，乌云塔娜，杜红岩，等．杜仲MEP途径系列基因的列特征研究[D]．北京：中国林业科学研究院，2012．基因结构预测[J]．经济林研究，2013，31(4)：39—44．赵丹．杜仲法尼基焦磷酸合成酶基因超量表达对含胶细胞[本文编校：吴彬]