基因工程的操作程序1概要.ppt

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1、复习旧知：限制酶DNA连接酶分布：特点：作用：作用的部位：结果：主要是原核生物只能识别特定的核苷酸序列并在特定位点上切割DNA分子切割DNA分子磷酸二酯键黏性末端或平末端种类：作用：连接部位：连接类型：E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶连接DNA片段磷酸二酯键E.coliDNA连接酶：T4DNA连接酶：黏性平或黏性3.基因的载体——“分子运输车”⑵载体必须具备的条件：①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；②具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接；③具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）④对受体细胞无害⑴作用：①将外源基因

2、转移到受体细胞中去。②利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。⑶常用的载体有：质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等质粒质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中,酵母菌中也有分布，是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的小型环状DNA分子。要对天然质粒进行人工改造能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。质粒种类项目限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用的底物作用部位作用结果DNA分子磷酸二酯键形成黏性末端或平末端DNA分子片段磷酸二酯键磷酸二酯键形成重组DNA分子脱氧核苷酸

3、形成子代DNA分子DNA分子氢键形成单链DNA分子§与DNA有关酶的比较图示1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子终止子:DNA分子中终止转录的核苷酸序列。启动子：是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。RNA聚合酶:能够识别启动子上结合位点的一种蛋白质，且能聚合转录所形成的mRNA。RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落

4、下来。①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列.包括启动子和终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列非编码序列：包括非编码区和内含子上游：下游：启动子终止子原核细胞不具有剪切、拼接m

5、RNA的能力，所以真核细胞的基因不能在原核细胞的受体细胞中正确表达原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码注意：终止子与终止密码的区别1、终止子是DNA分子上决定转录停止的一段DNA序列，其组成单位是脱氧核苷酸2、终止密码子是指mRNA分子上决定翻译停止的三个相邻碱基，其组成单位是核糖核苷酸如何让大肠杆菌生产胰岛素？1.2基因工程的基本操作程序基

6、因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取(一)、目的基因是指______________________编码蛋白质的结构基因和一些具有调控作用的因子请举出三个以上的例子（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成1、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库（2）基因文库的种类基因组文库：含有一种生物的所有基因部分基因文库：如：cDNA文库）

7、：含有一种生物的部分基因（1）.基因文库①基因组文库的构建（3）.基因文库的构建方法通过对受体菌的培养而储存基因②cDNA文库的构建-----反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA反转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)cDNA文库的构建mRNA反转录cDNA(互补DNA）DNA聚合酶双链DNA②反转录法：基因重组反转录酶mRNAcDNA③基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较怎样从基因文库中得到我们所需