我的基因工程操作程序1.ppt

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1、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？为什么要获得目的基因为什么要把目的基因与载体结合受体细胞是指什么?为什么要导入受体细胞为什么要进行目的基因的检测一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的基因请举出三个以上的例子如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。一、目的基因的获取2、获取目的基因的方法1）构建基因文库，从中调用目的基

2、因2）利用PCR技术扩增目的基因3）人工合成1.什么是基因文库？2.如何构建基因文库？3.如何从基因文库中调出目的基因？种类：基因组文库：部分基因文库：编码区上游编码区下游RNA聚合酶结合位点RNA聚合酶结合位点编码蛋白质调控调控原核细胞真核细胞基因组文库的构建将总DNA经过酶解，经电泳分离成不同长短的DNA片段并分别拼接在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组文库。部分基因文库的构建：如cDNA文库的构建基因组文库与部分基因文库的区别1.基因组文库是总DNA经限制酶随机酶切而成，

3、有可能会破坏完整的基因；且含有内含子序列，以原核生物为载体构建该文库时，内含子序列是无法识别的，造成不能正确转录翻译。2.反转录人工合成互补DNA获取的DNA片段无内含子序列往往可以直接作为具有特定功能的目的基因5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1.目的基因DNA受热变性，解链；2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。5/3/A—G引物Ⅰ利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制_________

4、__的核酸合成技术③条件：_______________、____________、_________________________、__________________②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA双链复制四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增PCR技术温度控制a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、复性（复性25℃

5、-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链⑥过程：PCR扩增仪