2015 12基因工程的基本操作程序（上课用）.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤C1．基因工程的正确操作步骤是(　　)①使目的基因与载体相结合②将目的基因导入受体细胞③验证目的基因的表达是否符合特定性状要求④提取目的基因A．③②④①　　B．②④①③C．④①②③D．③④①②C一、目的基因的获取(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的基因请举出三个以上的例子（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR

2、技术扩增3、人工合成请阅读P9第一和二两段化学合成法反（逆）转录法一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取1.基因文库：概念见P92.种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因如：cDNA文库提取某种生物的全部DNA限制酶一定大小的DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库P10基因组文库某种生物的单链mRNA单链cDNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶P10cDNA文库基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较P101.概念

3、：3.原理：(二)利用PCR技术扩增目的基因4.前提：2.目的：6.过程：7.特点：阅读P10最后两段思考5.条件：1.PCR含义：P10以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）DNA复制（碱基互补配对原则）模板DNA、原料(四种脱氧核苷酸)、能量、酶（热稳定DNA聚合酶）、引物、温度指数2n有一段已知目的基因的核苷酸序列大量扩增目的基因5.条件：3.原理：2.目的：4.前提：7.过程：8.特点：(二)利用PCR技术扩增目的基因过程P10高温变性（解旋为单链）低温退火（引物与单链互补结合）适温延伸（在Taq

4、酶的作用下合成与模板互补的DNA双链）PCR过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链PCR动画PCR技术扩增与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋解旋酶

5、催化体外复制细胞核内热稳定的DNA聚合酶细胞内的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子2．下列属于PCR技术的条件的是（）①引物②目的基因所在的DNA片段③游离的4种脱氧核苷酸④游离的4种核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性核酸内切酶A．①②③⑤B．①②③⑥C．①②③⑤⑦D．①②④⑤⑦B3．下列有关PCR技术的叙述正确的是　A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中　B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中　C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中　D

6、.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中B目的基因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)逆转录酶合成1）反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：3、人工合成的目的基因小结（二）、获取目的基因的方法1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成1、从生物材料中直接提取2、人工合成反（逆）转录

7、法根据蛋白质的氨基酸序列合成DNAD4.下列获取目的基因的方法中需要模板的是(　　)①从基因文库中获取目的基因　②利用PCR技术扩增目的基因　③反转录法　④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成DNAA．①②③④B．①②③C．②③④D．②③D质粒目的基因限制酶DNA连接酶基因表达载体——重组DNA二、基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶构建过程构建目的（基因表达载体功能）？起初科学家把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导

8、入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。资料:它们各自的作用是什么?1、目的基因2、启动子3、终