拟黑多刺蚁（Polyrhachis vicina）性腺雌激素相关受体基因的表达.pdf

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1、第35卷总第93期西北民族大学学报(自然科学版)Vo1．35，No．12014年3月JournalofNorthwestuniversityforNationalities(NaturalScience)March，2014拟黑多刺蚁(Polyrhachisvicina)性腺雌激素相关受体基因的表达欧阳霞辉，侯兰新，高丹丹，陈红(西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030)[摘要】采用原位杂交方法对拟黑多刺(Polyrhachisvidm)蚁后卵巢中和雄蚁精巢中pvERRmRNA的表达进行了检测．结果表明。pvERRmRNA在卵子发生过程中滤泡细胞的胞质和

2、生长期、卵黄发生期的卵母细胞有表达．在变形期的精细胞胞质和成熟精子头部有很强的表达．[关键词]拟黑多刺蚁；pvERR；原位杂交；性腺雌激素[中图分类号](／965[文献标识码]A[文章编号]1009—2102(2014)01—0053—05在哺乳动物中，雌激素及其受体既影响乳腺、子宫和卵巢等生殖系统的生长、分化及功能，又对骨骼、心血管系统和中枢神经系统发挥作用⋯．雌激素受体一旦与雌激素结合，就会发生变构形成二聚体，然后与雌激素受体反应元件(estrogenresponseelement，ERE)结合，刺激靶基因转录，从而调节雌激素促进细胞增生、分化和维持正常的生理功

3、能心]．ERR(Estrogenrelatedreceptor，ERR)属于孤儿核因子受体，在结构上和ER非常类似，它们和ER共同构成核因子受体超家族的第三亚族，能够直接与类固醇受体共激活子结合激活靶基因的表达．与ER不同的是，它们不与雌激素结合，但能够与雌激素应答元件结合]，表明在与共同的共激活子作用时它们之间存在相互竞争作用J．哺乳动物ERs存在于ERs存在的多种靶器官和组织．对鼠类的研究发现，EIa在各种胚胎组织中都有表达，在胚胎干细胞中也能检测到ERRamRNA的表达，表明ERRa与众多生理和发育过程有关．几乎在老鼠每一种成体组织中都有ERRa表达，而且在大

4、脑、心脏、骨骼肌、肾、精巢和子宫等部位有高度表达[5—1．ERRa在ERa存在的丘脑和视丘下部和垂体前叶也有表达，推测它也可能参与了生殖调控，对ERa的表达起反馈调节作用[51．ER即的mRNA表达从原始生殖细胞迁移到生殖脊开始，一直持续到两性性别出现，ER即缺失引起生殖腺生殖细胞的数量明显减少，表明ER即明显参与了生殖腺生殖细胞的增殖[．尽管对哺乳动物ERR的研究比较深入，但在昆虫类，虽然Genebank中存在一些昆虫ER的序列，也有对黑腹果蝇dERR配体的研究报道[引，但是有关ER功能的研究很少．何慧等对黄脸油葫芦雌激素相关受体TeER的研究也发现，TeER与黄

5、脸油葫芦的发育有关，在幼虫的胚胎期和生殖腺表达量很高【9]．为了了解pvERR在性腺中的表达情况，我们采用原位杂交技术对拟黑多刺蚁蚁后卵巢中和雄蚁精巢中pvERRmRNA的表达进行了定位研究，以期为进一步的功能研究奠定基础．[收稿日期]2014—02—10[基金项目]甘肃省青年科学基金项目资助(1208YA012)．[作者简介]欧阳霞辉(1978一)，女，甘肃靖远人，博士，副教授，主要从事昆虫生殖与发育方面的研究一53—1材料与方法1．1实验材料以本实验室饲养的拟黑多刺蚁(Polyrhachisvicina)蚁后和雄蚁为研究对象．饲养条件：温度25～28℃，相对湿度

6、80％，光周期12L：12D．饲料为20％的白糖水和豆饼菜叶．采用经过消毒的刀片迅速分别将蚁后、雄蚁的腹部切下，立即放入含有0．1％DEPC的多聚甲醛固定液中固定8h．1．2原位杂交拟黑多刺蚁ERR原位杂交试剂盒(订制)购自武汉博士德生物工程公司，试剂盒包括：胃蛋白酶；预杂交液；ERR寡核苷酸探针杂交液(根据所测拟黑多刺蚁ERR序列设计，5’一tgaagcatatctggctcgcaagctgctaaggc一3’，地高辛标记)，封闭液，生物素化鼠抗地高辛，SABC，生物素化过氧化物酶．将固定好的材料放入30％蔗糖溶液中于4℃过夜，用冰冻包埋剂包埋，切片．切片厚15m

7、，将切片粘于载玻片上，晾干备用．实验流程如下：①洗涤．将贴有材料的载玻片置于高压灭菌的0．1％DEPC水中充分洗涤．②封闭内源性酶：切片入0．3％H202室温处理30min，0．1％DEPC水洗3次．③暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3％柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化5min．原位杂交用PBS洗3次，每次5min．④后固定：切片入1％多聚甲醛(含有0．1％DEPC)室温固定10min，0．1％DEPC水洗3次．⑤预杂交：每张切片滴加20L预杂交液，恒温箱40℃预杂交4h．⑥杂交：每张切片滴加20L杂交液，恒温箱中40℃杂交过夜．⑦杂交后洗涤：37℃2×SS