两种蚜虫携带百合无症病毒、烟草花叶病毒的基因芯片检测.pdf

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1、●CT●IilIRICUtTURAE华北农学报·2014,29(1):2O一24I●骶aLl—sIm哺两种蚜虫携带百合无症病毒、烟草花叶病毒的基因芯片检测贾慧,郑洁,孟庆江,曹志艳(1.河北农业大学生命科学学院,河北保定071000;2.河北农业大学科技处,河北保定071000)摘要:蚜虫作为病毒的传播介体为害植物造成的经济损失远远超过蚜虫本身,因此急需建立快速、准确、灵敏的蚜虫带毒检测方法。根据百合无症病毒(LSV)和烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白基因保守序列设计引物与探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游

2、引物,提取饲毒(LSV和TMV)棉蚜、桃蚜总RNA,RT—PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以同时检测上述2种蚜虫的带毒情况,此方法有较好的特异性和重复性,能快速、准确地对介体蚜虫的带毒情况进行检测。关键词:棉蚜;桃蚜;百合无症病毒;烟草花叶病毒;基因芯片;检测中图分类号:$432.4;Q78文献标识码:A文章编号:1000—7091(2014)叭一0020—05DetectionofTwoKindsofAphidsCarriedLSV,TMVwithDNAMicroar

3、ryJIAHui,ZHENGJie,MENGQing—jiang,CAOZhiyan(1.CollegeofLifeScience,AgricultureUniversityofHebei,Baoding071000,China;2.TechnologyManagementOfice,AgricultureUniversityofHebei,Baoding071000,China)Abstract:AphidtransmissionO±thevirusasamediatorharmplantsfarmore

4、thaneconomiclossescausedbyaphidsthemselves.So,rapid,sensitiveandspecificmethod,bywhichvirusescarriedbyaphidscanbedetectedsim-uhaneously,isneededurgently.Inthisstudy,accordingtotheLilysymptomlessvirus(LSV)andtheTobaccomosa—icvirus(TMV)coatproteingenesequenc

5、e,primersandprobesweredesigned,genechipwasprepared.Thedown-streamprimerswerelabeledbyCy3.ThetotalRNAwasextractedfrom却hisgossypiiandMyzusperdicaeraisedwithlilyinfectedbyLSVandTMVrespectively.TheproductamplifiedbyRT-PCRusingthelabeledprimerswashybrid—izedwit

6、hthegenechip.Thehybridizationsignalwasdetectedandanalyzedbyafluorescencescanner.Theresultshowedthatthechipcansimultaneouslydetectbothaphidsinfectedcases,thismethodhasgoodspecificityandre-producibility,fastandaccurateonthemediatorinfectedaphidsweredetected.

7、Keywords:Aphisgossypii;Myzusperdicae;Lilysymptomlessvirus;Tobaccomosaicvirus;Genechip;Detection自20世纪80年代初SBH(Sequencingbyhy—ernBlot和No~hernBlot等)技术相比,基因芯片技bridization)概念提出,以美国为主开始进行各种生术将大量的核酸分子同时固定于载体上,一次性检物芯片的研制,90年代以来,芯片技术得以迅速发测、分析DNA/RNA信息,解决了传统杂交技术的操展,

8、并呈现发展高峰。基因芯片也叫DNA微阵列作复杂、自动化程度低、检测目标分子数量有限等不(DNAmicroarry),先将预先设计好的无数寡核苷足;目前,在发掘新基因、疾病诊断、基因表达规律及酸、cDNA、基因组(Genomic)DNA固定于玻璃片基新靶标药物筛选等各个领域有广泛应用。在病上形成矩阵,并与待测样品中同源核酸分子序列杂毒病诊断方面,基因芯片技术已经应用于人体,如乙交,然后解读和分析样品序列信息,高效、

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