赤霉素萃余液降解微生物的分离筛选及其降解 COD 的研究.pdf

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1、亿学与生物互程2014．VoI．31No．08团Chemistry&Bioengineeringdoi：10．3969／j．issn．1672—5425．2014．08．016赤霉素萃余液降解微生物的分离筛选及其降解COD的研究张金儿，刘义雄，毛玉华，朱江萍，叶晓斌，肖芳，涂国全(江西新瑞丰生化有限公司，江西新干331307)摘要：为提高赤霉素萃余液中COD降解率、减轻赤霉素萃余液对废水处理站运行负荷的压力，对土壤样品进行富集培养、分离筛选获得“三耐”高效微生物(菌或菌群)．并以赤霉素萃余液为发酵基质．免蒸静止连续发酵获

2、得高效降解赤霉素萃余液COD的微生物茵群。该混合茵群在赤霉素萃余液中能较好生长繁殖，培养7d后，赤霉素萃余液COD从约l00000mg·L下降到约40000mg·L～，COD降解率达60以上．为萃余液的处理开辟了新途径。关键词：赤霉素萃余液；有机物高效降解茵株；免蒸静止连续发酵；COD降解中图分类号：TQ920．1文献标识码：A文章编号：1672-5425(2014)08—0057—04赤霉素是植物五大激素之一，主要由藤仓赤霉菌及其变种通过液体深层有氧发酵而得。赤霉素萃余液／／一＼是赤霉素浓缩液经溶媒萃取后的高浓度有机废

3、液，具_鬻Ir#／／,"鬻器嵩有显著的“三高”特点：高酸性(pH值≤2．2)、高盐(盐．浓度≥1O)、超高有机浓度(≥i00000mg·L-1)，一般菌在此废液中难以存活L1]。利用酵母菌和乳酸菌混合发酵降解赤霉素萃余液中COD的技术路线初步可行[1]，但降解效果并不理，想。作者在此通过富集培养筛选得到“三耐”(耐酸、耐翼翼／疆疆强盐、耐高浓度有机物)的高效降解赤霉素萃余液的不同次复}／，t／_∞赣翻llI类型的微生物(菌或菌群)，并通过不同类型微生物的n丌丌I1，／、摇敝次复筛●：＼}＼{＼＼科学配伍进行免蒸静止连续发

4、酵，对赤霉素萃余液进复筛圈‘■l衄矗1llH”行高效降解，拟为抗生素发酵萃余液的处理开辟新途／／次复筛蹦径，具有重要的理论研究和实际应用价值。图1定向富集培养分离筛选流程Fig．1Processofredirectenrichment，isolationandscreening1实验1．1材料保污泥、小便池及营养丰富的土壤等地深2Ocm处取赤霉素萃余液，江西新瑞丰生化有限公司；xm土壤500g左右，装于牛皮纸信封或塑料袋中，记录土菌，江西农业大学生物工程学院。样来源并编号。将采集的土样于37℃培养烘干，然后1．2方法用木

5、棒将烘干土样压成粉末，备用。1．2．1定向富集培养分离筛选流程(图i)1．2．3不同pH值赤霉素萃余液的制备与分装1．2．2土样采集取赤霉素萃余液3份，缓慢加入6tool·L分别从长期堆放赤霉素发酵液滤渣场地、稻田、环NaOH溶液，分别调pH值为5．0、6．0和7．0，等量分基金项目：江西省科技支撑计划项目(2O12BBG7O266)收稿日期：2014—04—10作者简介：张金儿(1972-)，男。江西新干人．高级工程师，研究方向：菌种选育和发酵工程，E-mail．zje263@126．corn。张金儿等：赤霉素萃余液降

6、解微生物的分离筛选及其降解COD的研究／2014年第8期装于若干小试管中。1．2．7免蒸静止连续发酵1．2．4富集培养1)小试1)第一次富集培养在25OmL三角瓶中装入pH值为6．0的赤霉素每次做2O个土样。每个土样取1g左右放入上萃余液100mL，按1O～15的接种量分别接入筛述试管内，用棉塞塞试管口。其中pH值5．0、6．0、选所得单株高效菌或配伍菌，在28～32℃发酵，从7．0各接种3支，分别置于2O℃、28℃和37℃温箱中41h开始取样检测COD值、固含量和pH值。培养4～6d后观察培养液的颜色并检测pH值。以2

7、)中试不接种土样为对照。分别对颜色和pH值变化显著的在100L发酵罐中加入8OLpH值为6．0左右的富集管取样涂片进行显微观察，以确定培养液中是否赤霉素萃余液，在28～32℃发酵，接种后2d内少量有微生物并初步确定是细菌、放线菌、霉菌还是酵母通气，2d后停止通气，每天搅拌3～4次，每次10菌。将颜色和pH值无明显变化的富集管弃去。min。接种量和检测项目与小试相同。2)第二次富集培养1．2．8分析检测分别取第一次富集培养中确定有微生物的富集液颜色：目测。接种于对应的pH值培养液中，在对应的培养温度下pH值：采用pH酸度计

8、测定。进行第二次富集培养，3～4d后观察培养液的颜色、菌体形态：涂片染色，在普通光学显微镜下观察。检测pH值．并进行镜检。固含量：采用离心沉淀法测定，于4000r·rain3)第三次富集培养离心10rain，按下式计算固含量：取第二次富集液同法进行第三次富集培养。N~!it-X1001．2．5分离COD值：于4000