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《苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、微生物技术大实验期末论文报告苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究摘要：［目的］从炼油厂的活性污泥中分离高效苯酚降解菌，对其进行形态学鉴定，并研究其特性，为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有一定的理论和实际应用价值。［方法］从南京金陵石化炼油厂的活性污泥中筛选、驯化得到1株高效苯酚降解菌株P4。通过形态学对其进行鉴定。最后，对P4的苯酚降解特性进行研究。［结果］P4为革兰氏阴性球菌，最适降解苯酚的温度为28℃，最适pH为5.5;36h内对300mg/L的无机培养液苯酚降解率达到56.6%。［结论］
2、P4具有较强的适应能力和苯酚降解能力，可用于高浓度含酚废水的生物处理，有较高的研究及应用前景。关键词:苯酚降解菌;筛选;驯化;最佳降解条件苯酚是有机合成的重要原料，是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药和医药合成等行业生产的原料或中间体[1]，大量用于制造酚醛树脂以及其他高分子材料、药物、燃料和炸药等。随着树脂、化工和高分子材料等企业对苯酚需求量的日益增加，各企业所排放的含苯酚废水量也日益增加[2]。由于苯酚是一种原型质毒物，具有很强的毒性，对生态环境和人体健康构成巨大威胁[3,4]。在许多国家，苯酚已被环保部门列
3、入优先控制污染物的黑名单之中[5,6]。结合国标GB8978-1996的实施，有关工作人员将每升1000毫克以上的含酚废水进行回收处理；每升1000毫克以下的含酚废水浓缩后回收处理；每升300毫克以下的含酚废水才允许采用某种方法清除废水中苯酚，处理达标后排放。清除工业废水中苯酚的方法主要分为三大类：物理处理方法、高级氧化处理技术、生物治理方法。常用的物理处理方法包括吸附法、溶剂萃取法、膜萃取技术和膜蒸馏技术等；常用的高级氧化处理技术包括湿式催化氧化技术、光催化氧化技术和电催化氧化技术等；常用的生物治理方法包
4、括活性污泥法、酶处理技术和固定化微生物技术等[7]。其中利用微生物降解苯酚不仅处理效率高、二次污染少，而且成本低廉、简单方便，因此生物降解法成为经济效益和环境效益俱佳的苯酚清除方法[8]。在已有研究的基础上，本实验小组从南京金陵石化炼油厂中取得处理含酚废水的活性污泥，分离筛选出一株对苯酚具有高效降解能力的菌株，并对其进行了形态学和降解特性的研究，以期为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有重要的理论和实际应用价值。8微生物技术大实验期末论文报告1材料与方法1.1材料1.1.1菌株菌株来源于南京金陵石
5、化炼油厂的活性污泥。1.1.2培养基[9]（1）无机盐培养液:MgSO490mg，CaCl20.8mg，MnSO40.9mg，K2HPO4400mg，FeCl36mg，NH4NO3600mg，溶解后加蒸馏水定容至1L，调节pH至7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min。（2）富集培养基:牛肉浸膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂18g,溶解后加蒸馏水定容至1L,苯酚1000mg/L，pH7.4~7.6，121℃高压蒸汽灭菌20min。（3）琼脂平板(分离培养基):在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上加入不同浓度的苯
6、酚。（4）斜面培养基(保存培养基):牛肉浸膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂18g,溶解后加蒸馏水定容至1L，pH7.4~7.6，121℃高压蒸汽灭菌20min。1.1.3试剂和溶液酚标准液，2%4-氨基安替比林溶液，8%铁氰化钾溶液，氯仿，20%氨性氯化铵缓冲液。1.1.4主要仪器显微镜、721紫外分光光度计、摇床恒温培养箱、大容量高压灭菌锅、超净工作台等。1.2方法1.2.1苯酚降解菌的筛选驯化富集培养：将新鲜的活性污泥在空气中曝气24h,使其中微生物处于内源代谢阶段。取样品1g加入含100mL液体
7、富集培养基的250mL锥形瓶中，在220r/min、30℃摇床培养24h。筛选驯化[10]：采用逐级驯化方法。取污泥1g接入含苯酚500mg/L100mL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中（做三个样）,220r/min、30℃摇床培养72h后，取1mL驯化的菌液于1000mg/L的无机盐培养基中驯化。分离纯化[10][11]8微生物技术大实验期末论文报告：采用梯度平板法分离。配制苯酚浓度为300mg/L、500mg/L、800mg/L、1000mg/L、1200mg/L作为惟一碳源的固体培养基。然后将纯化得到菌株分
8、别划线培养在这5个梯度的培养基上。在30℃的生化培养箱中培养72h。从中筛选出耐受苯酚能力最强的菌株。分别以无菌操作琼脂平板划线分离,每个样瓶划两个平板,置30℃电热恒温箱中培养48h后,挑取单一菌落在斜面上纯化，接种于牛肉膏斜面上,同一条件继续培养48h后,4℃冰箱保存。1.2.2菌种的观察与鉴别观察并记录微生物的生长状况、个体形态特征、菌落特征，对菌株进行革兰氏染色。1.2.3苯酚含量的测定[12]用无酚蒸馏
