QS 6 7 绝对定量简易操作流程.pdf

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1、AppliedBiosystemsQuantStudio6&7实时荧光定量PCR仪V1.X绝对定量简易操作流程绝对定量实验简易操作流程1.双击桌面图标，或从Start>Allprograms>AppliedBiosystems>QuantStudio™Real-TimePCRSoftware>QuantStudio™Real-TimePCRSoftware开启软件。进入主界面后选择“ExperimentSetup”。2.进入“Setup”下的“ExperimentProperties”界面。绝对定量实验简易操作流程2.1输入实验名称(ExperimentName)。2.2选择仪器类

2、型及Block类型。2.3选择绝对定量实验类型，“StandardCurve”。2.4选择试剂种类。Taqman探针法选择“TaqmanReagents”，SYBR染料法选择“SYBRGreenReagents”。2.5选择运行模式。普通试剂选择“Standard”；快速试剂选择“Fast"。3.选择“Setup”下的“Define”界面，设置基因名称(Target)和样品名称(Sample)。绝对定量实验简易操作流程3.1在“Targets”下点击“New”，添加待测基因。在“TargetName”中编辑基因名称；“Reporter”和“Quencher”中选择所标记的荧光基团及

3、淬灭基团。对于“Quencher”的选择，如果是MGB探针，请选择NFQ-MGB；如果是TAMRA探针，请选择TAMRA；如果是其他形式的非荧光淬灭基团则选择"None"。3.2在“Samples”下点击“New”，添加待测样品。在“SampleName”中编辑样品名称。绝对定量实验简易操作流程4.选择“Setup”下的“Assign”界面，编辑样品板。4.1利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在“Task”选项中指定该反应孔的类型(S代表标准品，U代表未知样本，N代表阴性对照)。4.2设置标准曲线：利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔(一般情况下，每个梯度设置

4、至少三个副孔)，而后勾选左侧的基因，在“Task”选项中选择S，并在“Quantity”中输入标准品量。重复上述操作，完成标准曲线其他浓度点的设置(建议设置至少5个梯度)。绝对定量实验简易操作流程5.选择“Setup”下的“RunMethod”界面，编辑运行条件。6.选择“Run”下的“AmplificationPlot”界面，点击“SaveAs”保存文件，击“StartRun”开始运行。绝对定量实验简易操作流程7.实验运行结束后，进入“Analysis”界面，点击右上角的“Analyze”按钮分析数据并查看扩增结果。绝对定量实验简易操作流程7.1设置基线和阈值线：软件默认使用“A

5、uto”功能自动设定基线和阈值线。查看阈值线或基线：选择需要查看的基因，将show后的“Threshold”及“Baseline”选择打勾。扩增曲线图上会出现相应的基线范围和阈值线。若需要手动设置基线和阈值线，则可去掉“Auto”的勾选，进行手动调节。7.2查看标准曲线：通过更改“Target”来选择查看的基因。Eff%代表扩增效率。R2值代表标准曲线的数据点与回归曲线的接近程度，建绝对定量实验简易操作流程议在0.99以上。7.3对于SYBRGreen实验，可以在“MeltCurve”界面中查看熔解曲线。绝对定量实验简易操作流程7.4查看“QCSummary”结果：反应孔可能存在异

6、常情况时，会出现黄色三角提示，数字1代表有一种情况，2代表有两种情况，以此类推。详细信息及解决方案可以在“FlagDetails”中查看。8.数据导出：在Export界面下根据需要导出数据。绝对定量实验简易操作流程