金黄色葡菌球菌刺激巨噬细胞对JNK活化和Th1／Th2型细胞因子分泌的影响.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Apr；49(4)·423·◇基础医学研究◇金黄色葡菌球菌刺激巨噬细胞对JNK活化和Thl／Th2型细胞因子分泌的影响肖文艳，方磊，吴惠梅，丁佩山，刘荣玉摘要目的探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)刺激小鼠子又可以趋化T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等迁移进巨噬细胞系RAW264．7对c—Jun氨基末端激酶(JNK)信号通而导致气道持续炎症和严重损伤。研究¨显示金路活化及其对Thl／Th2型细胞因子表达的影响。方法体黄色葡萄球菌(简称金葡菌)细

2、胞壁成分肽聚糖可外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7细胞，以金葡菌的感以通过巨噬细胞表面Toll样受体2(Toll—likerecep—染复数(MOI)值为l0(金葡菌：细胞=10：1)刺激tor2，TLR2)介导活化丝裂原活化蛋白激酶(mitogen．RAW264．7细胞，设置时间点为0．5、1．0、1．5、2．0h。West—activatedproteinkinase，MAPK)家族的c．Jun氨基末ernblot检测金葡菌刺激后RAW264．7细胞JNK磷酸化水端激酶(c-Junamino-terminalk

3、inase，JNK)信号通平，ELISA法检测各时间点RAW264．7细胞上清液中白介素-5(IL-5)和干扰素一(IFN一)的表达水平。结果金葡菌路，特别是活化JNK信号通路能够促进巨噬细胞吞刺激RAW264．7细胞后JNK磷酸化水平显著升高，在0．5h噬金葡菌等病原体的过程J，并且活化的JNK信号最明显(P<0．01)；细胞上清液中IFN一水平在金葡菌刺激通路能够激活下游核转录因子系统释放多种细胞因后0．5、1．0h显著升高(P<0．01)，而在1．5、2．0h逐渐恢复子。因此，该研究拟通过金葡菌刺激小鼠巨噬细胞到正

4、常水平(P>0．05)；IL-5水平在金葡菌刺激后1．0h时来观察JNK信号通路的活化及其对IL-5、INF—炎开始升高(P<0．05)，并在1．5、2．0h显著升高(P<0．01)；性细胞因子分泌的影响。另外IL-5／IFN一在1．0、1．5、2．0h时差异均有统计学意义(P<0．01)。结论金葡菌刺激小鼠巨噬细胞系RAW264．71材料与方法细胞能够活化JNK通路，并影响Thl／Th2型细胞因子的表1．1实验材料小鼠单核一巨噬细胞系RAW264．7达。购于中国科学院上海细胞库；金葡菌NCTC8325由关键词巨噬细胞；

5、JNK；IL一5；IFN一中图分类号R562．2+5；Q241；Q74中国科学技术大学生命科学学院教授馈赠；DMEM文献标志码A文章编号1000—1492(2014)04—0423—04培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素均购于美国In-vitrogen公司；胰蛋白胨、酵母提取物购于英国Oxoid慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘等多种肺部疾公司；氯霉素购于上海现代哈森药业有限公司；细胞病的共同病理生理特征，是多种炎性细胞及细胞因裂解液由50mmolfLTris—HC1(pH7．4)、0．1％子相互作用所致的气道病变，在其病理生理

6、过程中，SDS、1％TritonX一100、0．25％脱氧胆酸钠，150巨噬细胞起着极其重要的作用。巨噬细胞在细菌毒mmol／L氯化钠和1mmol／LEDTA配制而成，蛋白素、烟雾等有害物质的刺激下，向肺组织迁移并释放酶抑制剂和磷酸酶抑制剂购于瑞士Roche公司；磷多种细胞因子如肿瘤坏死因子一仅(tumornecrosis酸化JNK(p-JNK)、JNK多克隆抗体购于美国CSTfactor一仅，TNF一仅)、干扰素一(interferon一^y，IFN一)、白公司；GAPDH单克隆抗体购于上海康成生物公司；介素(inte

7、rleukin，IL)-6、IL一5、IL4等，这些细胞因辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔二抗购于美国Promega公司；蛋白电泳转移系统购于美国Bio—2014—02—17接收Rad公司；PVDF膜购于美国Millipore公司；ECL化基金项目：国家自然科学基金(编号：81270083、81170030)；安徽省重点实验室计划项目(编号：1206c0805028)；安徽省科技攻学发光检测试剂盒购于美国Thermo公司；荧光化关项目(编号：12010402135)学发光成像系统购于上海欧翔科学仪器有限公司；作者单位

8、：安徽医科大学第一附属医院干部呼吸科，安徽省老年病研奥林巴斯倒置显微镜IX70购于日本Olmypus公司；究所，合肥230022IL．5、IFN．ELISA试剂盒购于武汉华美生物工程有作者简介：肖文艳，男，硕士研究生；限公司(IL．5货号：CSB．E04637m；IFN-货号：CSB-刘荣玉，女，教授，主任医师，博士