胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响.pdf

《胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中国药理学与毒理学杂志2013年8月第27卷第4期ChinJPharmacolToxicol，Vol27，No4，Aug2013·663·胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响张巍’，朱文赫’，李妍’，赵行宇，罗军，徐俊杰’，姜艳霞，金瑛。(吉林医药学院1．生物化学教研室，2．生理教研室，3．药物化学教研室，吉林吉林132013)摘要：目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞，加入胡桃醌10—200um01．L或者胡桃醌20umo卜L+顺铂20pmol·L继续培养8h或24h

2、，用倒置显微镜观察细胞形态的变化，用M1_r法测定细胞存活率，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10，20，50，100和200pmol·L与HeLa细胞作用24h，随着胡桃醌浓度的增加，光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆；HeLa细胞存活率明显降低，分别由对照组的(100．0±0．0)％降低至(87．24-5．6)％，(66．2±4．8)％，(54．5-I-4．9)％，(42．5±6．4)％和(32．0±2．2)％(P<0．05，P<0．01)；HeLa细胞G2／M期百分率逐渐增加，分别由对照组的(7．5±1．2)％增加到(12．9±1

3、．2)％，(16．2±2．8)％，(23．6±3．9)％，(34．2±4．2)％和(52．6±7．8)％(P<0．05，P<0．01)。胡桃醌联合顺铂作用24h，光镜下脱壁细胞增加，细胞形态变圆，较胡桃醌和顺铂单用组更加明显；联合用药组细胞存活率为(35．0±6．1)％，较胡桃醌和顺铂单用组[(78．2±12．5)％和(58．5±10．9)％]明显降低(P<0．01)。胡桃醌联合顺铂作用8h，HeLa细胞早期凋亡率为(24．6±5．7)％，高于胡桃醌和顺铂单用组[(6．7士1．5)％和(0．4±2．8)％](P<0．01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存

4、活，促进HeLa细胞凋亡，与顺铂联合使用具有协同作用。关键词：胡桃醌；顺铂；细胞凋亡；细胞周期中图分类号：R285，R979．1文献标志码：A文章编号：1000-3002(2013)04-0663-05DOl：10．3867／j．issn．1000-3002．2013．04．010胡桃醌(juglone，nuein)，化学名为5-羟基-湿度培养箱中培养；细胞单层贴壁生长，每2d更换1，4-萘醌或5一羟基-1，4一萘二酮，是从胡桃楸新鲜根1次培养基，每周按1：3传代1次。噻唑蓝(M1-r)、皮、枝皮、青果皮中分离出来的羟基萘醌类化合物，二甲亚砜(DMSO)

5、和碘化丙啶(propidiumiodide，PI)是胡桃楸中主要的毒性物质¨J。研究发现，胡桃醌购自Sigma公司。流式细胞仪，BDFACScanto，体外对人结肠癌细胞(HCT一15)和人淋巴瘤细胞等美国；Olympus倒置显微镜，日本。多种肿瘤细胞生长具有抑制作用I3J。尚无对宫颈1．2细胞形态观察癌细胞影响的研究报道。本研究观察胡桃醌及其与取对数生长期的HeLa细胞，培养24h后弃上清，顺铂联合应用对人宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的分别加入胡桃醌10，20，50，100和200pmol·L～，或影响，并对其作用机制进行初步探讨。者胡桃醌20pmol

6、·L～，顺铂20pmol·L及胡桃醌20pmol·L+顺铂20pmol·L～，同时设正常对照1材料与方法组，每组设4复孔。用DMEM培养基分别培养24h后，于倒置显微镜下观察HeLa细胞形态的变化。1．1药物、细胞、主要试剂和仪器1．3MTT法检测细胞存活胡桃醌(纯度97％)购自Sigma公司；顺铂取对数生长期的HeLa细胞，培养24h后去上(cisplatin)购自山东齐鲁药业公司。人宫颈癌清，细胞处理同1．2。空白组不加细胞，只加DMEMHeLa细胞系，由本院科研实验室保存，复苏后细胞培养基。各组用DMEM培养基培养24h后，每孔置~DMEM完全培养

7、基中，在37~(3，5％CO2，95％加入20uIM1_r(终浓度5g·L)，37oC继续孵育4h，弃上清，每孔加入150plDMSO振荡10min，基金项目：国家自然科学基金项目(21102055)；吉林于570nm测定吸光度值()。存活率(％)=省教育厅项目(2009314)；吉林省教育厅项目(2Ol1286)作者简介：张巍(1972一)，女，博士，副教授，主要从(实验组一A空白组)／(A对照组一A空白组)×100％。事抗肿瘤中药筛选的研究工作。1．4流式细胞仪检测细胞周期通讯作者：金瑛，E-mail：jinying1021@sina．corn取对数

8、生长期的HeLa细胞，培养24h后弃上清，中国药理学与毒理学杂志2013年8月第