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《胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、中国药理学与毒理学杂志2013年8月第27卷第4期ChinJPharmacolToxicol,Vol27,No4,Aug2013·663·胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响张巍’,朱文赫’,李妍’,赵行宇,罗军,徐俊杰’,姜艳霞,金瑛。(吉林医药学院1.生物化学教研室,2.生理教研室,3.药物化学教研室,吉林吉林132013)摘要:目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10—200um01.L或者胡桃醌20umo卜L+顺铂20pmol·L继续培养8h或24h
2、,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用M1_r法测定细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10,20,50,100和200pmol·L与HeLa细胞作用24h,随着胡桃醌浓度的增加,光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆;HeLa细胞存活率明显降低,分别由对照组的(100.0±0.0)%降低至(87.24-5.6)%,(66.2±4.8)%,(54.5-I-4.9)%,(42.5±6.4)%和(32.0±2.2)%(P<0.05,P<0.01);HeLa细胞G2/M期百分率逐渐增加,分别由对照组的(7.5±1.2)%增加到(12.9±1
3、.2)%,(16.2±2.8)%,(23.6±3.9)%,(34.2±4.2)%和(52.6±7.8)%(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用24h,光镜下脱壁细胞增加,细胞形态变圆,较胡桃醌和顺铂单用组更加明显;联合用药组细胞存活率为(35.0±6.1)%,较胡桃醌和顺铂单用组[(78.2±12.5)%和(58.5±10.9)%]明显降低(P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用8h,HeLa细胞早期凋亡率为(24.6±5.7)%,高于胡桃醌和顺铂单用组[(6.7士1.5)%和(0.4±2.8)%](P<0.01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存
4、活,促进HeLa细胞凋亡,与顺铂联合使用具有协同作用。关键词:胡桃醌;顺铂;细胞凋亡;细胞周期中图分类号:R285,R979.1文献标志码:A文章编号:1000-3002(2013)04-0663-05DOl:10.3867/j.issn.1000-3002.2013.04.010胡桃醌(juglone,nuein),化学名为5-羟基-湿度培养箱中培养;细胞单层贴壁生长,每2d更换1,4-萘醌或5一羟基-1,4一萘二酮,是从胡桃楸新鲜根1次培养基,每周按1:3传代1次。噻唑蓝(M1-r)、皮、枝皮、青果皮中分离出来的羟基萘醌类化合物,二甲亚砜(DMSO)
5、和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)是胡桃楸中主要的毒性物质¨J。研究发现,胡桃醌购自Sigma公司。流式细胞仪,BDFACScanto,体外对人结肠癌细胞(HCT一15)和人淋巴瘤细胞等美国;Olympus倒置显微镜,日本。多种肿瘤细胞生长具有抑制作用I3J。尚无对宫颈1.2细胞形态观察癌细胞影响的研究报道。本研究观察胡桃醌及其与取对数生长期的HeLa细胞,培养24h后弃上清,顺铂联合应用对人宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的分别加入胡桃醌10,20,50,100和200pmol·L~,或影响,并对其作用机制进行初步探讨。者胡桃醌20pmol
6、·L~,顺铂20pmol·L及胡桃醌20pmol·L+顺铂20pmol·L~,同时设正常对照1材料与方法组,每组设4复孔。用DMEM培养基分别培养24h后,于倒置显微镜下观察HeLa细胞形态的变化。1.1药物、细胞、主要试剂和仪器1.3MTT法检测细胞存活胡桃醌(纯度97%)购自Sigma公司;顺铂取对数生长期的HeLa细胞,培养24h后去上(cisplatin)购自山东齐鲁药业公司。人宫颈癌清,细胞处理同1.2。空白组不加细胞,只加DMEMHeLa细胞系,由本院科研实验室保存,复苏后细胞培养基。各组用DMEM培养基培养24h后,每孔置~DMEM完全培养
7、基中,在37~(3,5%CO2,95%加入20uIM1_r(终浓度5g·L),37oC继续孵育4h,弃上清,每孔加入150plDMSO振荡10min,基金项目:国家自然科学基金项目(21102055);吉林于570nm测定吸光度值()。存活率(%)=省教育厅项目(2009314);吉林省教育厅项目(2Ol1286)作者简介:张巍(1972一),女,博士,副教授,主要从(实验组一A空白组)/(A对照组一A空白组)×100%。事抗肿瘤中药筛选的研究工作。1.4流式细胞仪检测细胞周期通讯作者:金瑛,E-mail:jinying1021@sina.corn取对数
8、生长期的HeLa细胞,培养24h后弃上清,中国药理学与毒理学杂志2013年8月第
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