吲哚胺2,3双加氧酶在系统性近平滑念珠菌感染小鼠中的作用.pdf

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1、288实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicinedoi：10．3969~．issn．1674—5817．2014．04．006吲哚胺2，3双加氧酶在系统性近平滑念珠菌感染小鼠中的作用吴玉娥，张钰，龚宝勇，陈梅玲，吴瑞可，贾欢欢，罗挺，高翔，黄韧(1．广东省实验动物监测所、广东省实验动物重点实验室，广州510663；2．广东医学院药理教研室，湛江510265)[摘要]目的观察吲哚胺2，3双加氧酶(IDO)在系统性近平滑念珠茵(cP)感染小鼠中的作用。方法SPF级雌性ICR小鼠分为3组，模型

2、组和抑制组小鼠尾静脉接种CP建立系统性近平滑念珠菌感染小鼠模型，对照组小鼠接种生理盐水。抑制组在接种CP当日经口给IDO抑制剂1甲基色氨酸(1一MT)，连续给药7d，模型组和对照组小鼠给生理盐水。分别在接菌后3d、6d和9d每组小鼠施行安死术5只，采集肾脏，进行ID0、炎症相关细胞因子检测，载茵量测定和组织病理学观察。结果小鼠感染CP后肾组织IDO相对表达量升高，给予1-MT后IDO相对表达量下降；模型组肾脏IFN—Y、TNF．O【、IL一6、IL．1B表达水平上调，抑制组除IFN一丫、TNF．0c、IL．6和IL一1D表达水平上调外，接

3、种CP后6d’肾脏IL一17表达水平显著升高；载菌量结果显示，与模型组比较，接菌后6d抑制组肾脏载菌量显著高于模型组；病理观察结果显示，抑制组肾脏真菌感染病灶数量增多，组织破坏严重。结论小鼠感染CP后肾组织IDO相对表达量升高，给予IDO抑制剂1-MT后肾组织IL．17表达水平升高，促进了慢性炎症，影响了真菌清除。[关键词】近平滑念珠菌(cP)；吲哚胺2，3双加氧酶(IDO)；小鼠[中图分类号]Q95．33[文献标识~i-B]A[文章编号]1674—5817(2014)04．0288．06近年来，随着广谱抗生素、实体器官移植、洲和南美洲等

4、地区近平滑念珠菌的血源性感染发生免疫抑制剂和细胞毒药物的广泛应用，免疫功能低率已经超过白色念珠菌，并呈逐年上升趋势。下患者不断增多，致使侵袭性念珠菌感染的发病率目前认为治疗念珠菌感染除了抗真菌药物以外，还和死亡率不断上升【”。资料显示，念珠菌血症成为需使机体处于高免疫状态。因此，深入探讨机体院内获得性血流感染主要原因，在美国和欧洲分别的免疫防御机制，设法激发和增强机体本身的免疫占据第4位和第7位病因，死亡率高达49％。感染能力将成为一种新的治疗策略。源亦从白色念珠菌逐渐转向非白念珠菌【z叫。一些吲哚胺2，3双加氧酶(indoleamine

5、2，3一国家的真菌流行病学调查研究表明，在欧洲、亚dioxygenase，IDO)是色氨酸犬尿氨酸代谢途径的限速酶。IDO的活性表达在免疫系统的反应调控中发挥着重要作用。近来研究发现IDO在真菌感【收稿日期]2014—01—27染中也发挥一定作用，抑制IDO途径可以使IL．17[基金项目]广东省自然科学基金项目(No．10151026005000—000)，广东省科技计划项目(No．2010B060500—产生增加，促进慢性炎症，破坏真菌的清除，而019)资助中和IL一17后可以增加真菌的清除率，改善炎症症[作者简介】吴玉娥(1978一)

6、，女，助理研究员，状，修复Thl的抗真菌反应【s叫。本实验将建立系E-mail：jadejoanjadejoan@163．com统性近平滑念珠菌感染小鼠模型，然后给予IDO抑[通讯作者】黄韧(1959一)，男，博士，研究员，制剂I-MT，观察IDO在系统性近平滑念珠菌(CP)E—mail：labking@sohu．comAug．2014，34(4)实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine289感染小鼠中的作用，为真菌感染的免疫干预治疗提1．5．2IDO在’肾脏中的表达利用Western

7、Blot检供新思路。测小鼠肾组织中IDO蛋白表达水平。取肾脏称重，加入蛋白裂解液充分裂解，测定蛋白浓度，取等1材料与方法量的蛋白，98℃热变性后进行12％SDS—PAGE。半干转仪器将蛋白转移至PVDF膜上，5％牛奶室1．1实验动物与分组温封闭1h，TBST洗膜，加入抗IDO(1：250)抗SPF级6～8周龄雌性ICR小鼠，购白北京维通体和~-actin(1：1ooo)抗体，4℃过夜，TBST洗膜，利华实验动物技术有限公司[SCXK(京)2012—0001】。以HRP标记的二抗(1：100o)室温下孵育2h，TBST动物饲养于广东省实验动

8、物监测所感染动物实验室洗膜3次，加入ECL液发光，x光片盒中曝光，于【SYXK(粤)2012—0122]。实验分为模型组(CP)、抑暗室中显影拍照。以B—actin做内参，利用Image制组(