总糖的测定方法.doc

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1、铁氰化钾滴定法准确称取经105℃烘干并冷却之后的样品5.000g，用少量水溶解并移入500ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取出此液50ml于100ml容量瓶中，加盐酸5ml摇匀，置65～70℃水浴上加温30min，取出，迅速冷却至室温。用30%氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，摇匀，倒入滴定管中。吸取已配制好的铁氰化钾溶液5ml于150ml三角瓶中，加入2.5ml10%氢氧化钠溶液、12.5ml水和洁净的玻璃珠数个，于石棉网上加热至沸腾，保持1min。然后加入次甲基蓝指示剂1滴，立即以样品液滴定至蓝色消失为止，记录用量。正式滴定时，先加入比预

2、实验少0.5ml的样品液，煮沸1min，加入次甲基蓝指示剂1滴，再用样品液滴定至无色。按下述公式计算铁氰化钾的浓度：式中C：相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g)；V：滴定时消耗样品液的体积(ml)；W：称取的样品重量(g)；0.95：换算系数（1g蔗糖可转化为0.95g转化糖）称取样品5～10g（视含糖量多少而增减），用200ml左右的水洗入250ml容量瓶内（样品中如含有较多的蛋白质、色素、胶体等可逐渐加入20%醋酸铅溶液10～15ml，至沉淀完全为止。并加入10～15ml10%磷酸二氢钠溶液，至不再产生沉淀为止）。加水至刻度，摇匀

3、过滤。吸取滤液50ml于100ml容量瓶中，按上述铁氰化钾标定方法进行转化、中和及滴定（以样液代替糖液，其余操作相同）。按下述公式计算总糖含量：式中A：相当于5ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g)；V：滴定试样液消耗体积(ml)。蒽酮比色法测总糖实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收，在150µg/ml

4、范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100ml浓H2SO4中。当日配制使用。3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（ml）00.10.20.

5、30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（µg）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0min取出，用冰浴冷却至室温，在620nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2mm以下，105ºC烘干至恒重，精确称取1~5g，置于50ml三角瓶中，加沸水25m1，加盖，超

6、声提取10min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。3.稀释：吸取提取液2m1，置于另一50m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。4.测定吸取1ml已稀释的提取液于试管中，加入4.Oml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。五、结果处理C×V总×D样品含糖量（%）=─────────────×100W×V测×106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），V总——提取液总体积

7、（ml），V测——测定时取用体积（ml），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成µg的倍数六、注意事项：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，

8、否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五