血必净对急性肺损伤兔模型中NF—κB信号通路的影响及其临床意义.doc

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1、［摘要］目的观察血必净对急性肺损伤（ALI）伽模型核因子-kB（NF-kB）信号通路的影响及其对AIJ的治疗作用。方法选择新西兰兔80只，按随机方法分为四组:空白对照组、单纯急性肺损伤（LPS）组、单纯血必净（XBJ）组、血必净治疗组（LPS+XBJ）,并给予相应的治疗，于12、24、36.48h分批处死后分离肺组织后，采用凝胶电泳迁延率法（EMSA）加计算机辅助图像分析技术检测白细胞NF-kB活性。结果与空白对照组相比较，LPS组各时间点肺组织NF-kB表达量均明显增高（P0.05）。结论NE-kB参与了急性肺损伤过程，血必净能抑制NF-kB的表达，从而对肺组织起

2、到保护作用。［关键词］血必净；急性肺损伤；NF-kB［中图分类号］R563.1［文献标识码］A［文章编号］1673-7210（2012）10（c）-0019-02急性肺损伤（ALI）是常见的急危重症。AL1的基本发生机制为细胞因子的过度表达及相百之间的复杂作用，使肺毛细血管通透性增加，液体、溶质和细胞成分迁移至间质及肺泡腔，产生肺水肿［1］。ALI目前尚无特异治疗方法，在众多细胞因子中，核因子-kB（NF-kB）调控多种细胞因子和炎症介质的转录表达，在ALI的发病过程中发挥着重要作用。木研究基于中医学理论及笔者的临床经验，结合现代医学研究进展，通过制备内毒素型急性肺

3、损伤兔模型，观察中药制剂血必净注射液对ALI肺组织NF-kB的活性变化，探讨血必净注射液是否通过拮抗内毒素、抑制炎性介质释放和保护内皮功能等机制而发挥治疗作用，为中西医结合方法治疗ALI提供理论依据，提高抢救成功率。1材料与方法1.1材料脂多糖、内毒素脂多糖（LPS）及试剂盒购自广州晶美生物技术有限公司（代理美国Sigma公司产品）。NF-kB的同源结合序列由北京奥科生物技术公司合成并行末端生物素标记。血必净注射液由天津红口药业股份有限公司提供，批准文号：Z20040033,每支lOmLo有效成分是由中药原料药红花、赤芍、川芍、丹参、当归中提取，其提取物的有效成分包

4、括红花黄色素A、川萼嗪、丹参素、阿魏酸、芍药昔、原儿茶醛等。其中红花黄色素A浓度＞0.5mg/mL,芍药廿浓度＞1.0mg/mL,阿魏酸浓度＞0.01mg/mLo1.2动物模型及分组1.2.1分组取新西兰兔80只（雄性），体重2.0〜2.5kg，按随机方法分为四组：空白对照组、单纯急性肺损伤（LPS）组、单纯血必净（XBJ）组、血必净治疗（LPS+XBJ）组，各20只。1.2.2动物模型制作1%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉,经耳缘静脉注入内毒素LPS,制成急性肺损伤的动物模型。1.2.3干预方法空白对照组给予生理盐水10mL注射,LPS组仅注射LPS5mg/kg

5、,XBJ组仅注射血必净5mL/kg,LPS+XBJ组注射LPS5mg/kg+血必净5mL/kg静脉注射。1.3观察指标及标准1.3.1血流动力学变化通过生物多导仪观察实验前后血流动力学变化，包括呼吸频率、心率、体温、动脉和静脉氧分压、体重等，在所需观察时间内抽取血液标本。1.3.2动物模型制作成功的病理指标LPS致伤后半小时处死动物，肺脏体积增大，表面可见大小不等的暗红色斑片状病灶，切面可有淡红或白色泡沫样液体溢出；光镜下观察，肺组织内有白细胞浸润，可见肺间质及肺泡水肿，肺出血明显。肺组织湿/干（W/D）比值明显升商。1.3.3肺组织病理形态变化于12、24、36、

6、48h分批处死后分离肺组织后，取右肺组织进行组织切片在光镜、电镜观察病理形态变化。1.3.4NF-kB活性测定分离左肺组织，采用4°C生理盐水进行左肺灌洗，收集灌洗液,取摇匀的灌洗液原液1滴，作细胞总数计数。灌洗液离心，细胞沉清涂片做Wrigh-Giemsa染色，镜下分类，计数巨噬细胞、中性粒细胞（PMN）,采用凝胶电泳迁延率法（EMSA）加计算机辅助图像分析技术检测白细胞NF-kB活性（按试剂盒说明操作）。1.4统计学方法使用SPSS12.0统计软件进行分析，计量资料采用均数土标准差（x土s）表示，重复测量的计量资料采用方差分析，样木均数之间的两两比较用q检验。以

7、PV0.05为差异有统计学意义。2结果与空白对照组比较，LPS组各时间点肺组织NF-kB表达量均明显增高（P0.05）o见表lo3讨论既往临床报道显示，接近半数的脓毒症患者发生ALT,进而发展成为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）,后者为脓毒症患者的主要死因之一。ALI发生时，肺组织中炎性因了大量表达,参与ARDS的发生发展。NF-kB是一组可被数百种上游因了激活的多效因子，其通过多条信号通路参与复杂的炎症反应。既往研究显示，NF-kB是脓毒症炎症反应的枢纽环节，其上游因了包括TLRs、TNF-a、C0X-2等，由于单纯下调某一上游因了并不能从根本上阻ll.ALl的