菊花的组织培养实验设计.doc

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1、菊花的组织培养实验设计菊花的组织培养实验设计植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细咆、胚乳等

2、）或细胞（如大泡子、小抱子、体细胞等）以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科植物组织培养：〈广义〉又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。〈狭义〉组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物组织培养的优点：1.不受生长季节的限制2.

3、不携带病毒3.培养周期短4.可用组培中的愈伤组织支取特殊的生化制品5.可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物6.可诱导之分化成需要的器官，如根和芽7.解决有些植物产种子少或无的难题，8.不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征9.投资少，经济效益高1.繁殖方式多，试用品种多植物组织培养一般分为以下几种：1、胚胎培养指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。2、器官培养指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果

4、实等的离体无菌培养。3、组织培养指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或己诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物组织培养。4、细胞培养指以单个游离细咆（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。5、原生质体培养。指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。培养材料的采集要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一"方面要在晴天，最好

5、是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。试剂乙机呵噪乙酸（IAA）或2,4-D（生长素类似物）。觐化汞（升汞）或次氯酸钠。6-苯基氨基腺嚎吟（6-BA）MS培养基0.1mol/LNaOH与0.1mol/LHC1配制培养基（1）愈伤组织诱导培养基：MS培养基（蔗糖含量为10g/L,

6、2,4-D含量为2mg/L,琼脂10g/L）。（2）试验培养基：在MS培养基中加入IAA和6-BA0R引噪乙酸（IAA）先用少量0.1mol/LNaOII溶解,6-节基氨基腺噤吟先用少量0.1mol/LIIC1溶解，然后用蒸馅水稀释，再加入培养基中。仪器设备。培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（lOOmL）,烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析夭平，长锻子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH5.8,趁热分装于100mL三角烧瓶中，每瓶约20mLo待培养基冷却凝固后，用一层称量纸和一层牛皮

7、纸包扎瓶（管）口，并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中121°C（1kg/cni2）下灭菌20min。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长锻子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。植物组织培养步骤第一步，将采来的菊花材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌•容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗儿分钟金数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在

8、植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于火菌液的直接接触。当然，最理