生物技术制药(精).doc

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1、《生物技术制药》殳习提纲2008生物技术制药复习提纲一、基木概念1.质粒：是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。2.贴壁细胞：生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因了才能在该表面上生长、增殖的一类细胞。3.悬浮细胞：生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长的一类细胞。4.抗体：是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。5.抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答、并能与相应免疫应答产物(抗体和致敏淋巳细胞)在体内外发生特异性结合的物质。6.半抗原：只有抗原性而无

2、免疫原性的物质。7.人-鼠嵌合抗体：在基因水平上将鼠源单抗的H和L链可变区基因分离出来，分别与人Ig的H和L链的稳定区(C)基因连接成人-鼠嵌合抗体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞,就能表达完整人-鼠嵌合抗体。8.改形抗体：又称CDR移植抗体，是Ig分子中参与构成抗原部位的区域，是II和L链V区的互补性决定区，而不是整个可变区。9.Fab抗体：具有完整的双价抗体活性,且保持抗体分子的立体构型，在人体稳定的小抗体雌形。Fv抗体：含有L链和Fd链一半的N端可变区，具有与完整抗体相似的结合能力的片段。10.单链抗体：是由一段弹性连接肽(Linke

3、r)把抗体可变区重链(VH)与轻链(VL)相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。11.植物的分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程，可分为胚胎发生和器官发生。12.脱分化:是指培养条件下使一•个己分化的细胞

4、叫复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。1.再分化:通过脱分化诱导形成的愈伤组织在适宜的培养条件下可再分化成为胚状体或直接分化出器官的过程。2.愈伤组织：是植物损伤后，在伤口长出的一块软组织。3.继代培养：由最初的外植体上切下的新增殖的组织，培养一代时间称之为第一代培养。连续多代的培养即

5、为继代培养。4.固定化酶：是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理,使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。5.固定化细胞：将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术。被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。6.模拟酶：是指根据酶的作用原理，用各种方法人为制造的具有酶性质的催化剂，亦称“人工虻7.细胞融合:是指认为地使两种不同的生物细胞在同一培养器中，用无性的人工方法进行直接接触，产生能同时表达两个亲木细胞有益性状的细胞杂交技术。8.免疫耐受:在某种情况下，抗原也可诱导相

6、应的淋巳细胞克隆对该抗原表现为特异性无应答状态。9.完全抗原:具有免疫原性和反应原性的物质。10.抗原决定簇：乂称表位，指抗原分了中决定抗原特异性的特殊化学基团，是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。11.单克隆抗体：是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。12.生理活性物质:是一类对细胞内的生化反应和生理活动起调节作用的物质的总称。二、技术原理1.简要说明影响目的基因高效表达的因素:（1）表达系统；（2）载体构建；（3）外源基因的拷贝数;（

7、4）外源基因的表达效率;（5）外源蛋白的糖基化；（6）宿主菌株的影响。1.基因载体应具备的条件：（1）具有复制起始点，使重组DNA能在受体细胞内进行复制，达到无性繁殖的目的（2）有多种限制性内切酶切点，但每种切曰最好只有1个；（3）有选择标记，例如抗药性标记，蓝白斑试验；（4）有一定容量；（5）有相当的拷贝数，即每个宿主菌可能容纳的最多数。2.导致基因工程菌中质粒不稳定的原因及如何提高质粒的稳定性？（1）分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒了代菌•的现象。结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变（2）导

8、致基因工程菌遗传不稳定性的原因：※受体细胞中的限制修饰系统对外源重组DNA分子的降解※外源基因的高效表达严重干扰受体细胞正常的生长代谢※重组.质粒在受体细胞分裂时的不均匀分配，这是重组质粒逃逸的基本原因※受体细胞中内源性的转座元件促进重组分子的缺失重排（3）提高稳定性的方法：※采用两阶段培养法：（先使菌体生长至一-定密度；再诱导外源基因的表达。）※在培养基中加入抗菌素抑制质粒丢失菌的生长，提高质粒稳定性。※调控环境参数如温度、pH、培养基组分和溶解氧浓度※有些含质粒菌对发酵环境的改变比不含质粒菌反应慢，间歇改变培养条件以改变两种菌比生长速率，

9、可改善质粒稳定性。通过间歇供氧和改变稀释速率，都可以提高质粒稳定性。1.简述三种分离纯化常用色谱方法的基木原理。⑴离了交换层析（IEC）基本原理：通过带电的溶质分子