气相色谱／质谱联用法鉴定人和大鼠肝微粒体中安定代谢物.pdf

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1、V01．33No．1分析试验室2014年1月6468ChineseJournalofAnalysisLaboratory第33卷第1期气相色谱／质谱联用法鉴定人和大鼠肝微粒体中安定代谢物高凡钦，黄克建，林翠梧，李宏森，刘晓锋，朱定姬。(1．广西大学化学化工学院，南宁530004；2．广西壮族自治区公安厅物证鉴定中心，南宁530012；3．广西职业病防治研究院，南宁530021)摘要：采用气相色质谱联用法(GC—MS)鉴定安定在女性混合和Wistar大鼠肝微粒体中的代谢产物，推测安定在女性混合和大鼠肝微粒体中可能

2、的代谢途径。在女性混合和Wistar大鼠肝微粒体中37℃恒温孵育48h，固相萃取(SPE)净化提取，GC—MS(EI)检测。女性混合和Wistar大鼠肝微粒体中均可代谢生成6一氯一4一苯基喹唑啉、6一氯一2一甲基一4一苯基喹唑啉、2一甲氨基一5一氯一二苯甲酮、6一氯一4一苯基一2(1H)一喹唑啉酮、6一氯一1，4一二氢一1一甲基一4一苯基喹唑啉、去甲安定和6一氯一1，2一二氢一1一甲基一2一氧一4一苯基喹唑啉7种代谢物；此外，女性混合肝微粒体中检出替马西泮，而Wistar大鼠肝微粒体中检出5一羟基苯基安定。推测

3、了安定在女性混合和Wist-ar大鼠肝微粒体(细胞色素P450酶系或者CYP450)中氧化、去甲基化等主要代谢途径和代谢特点，为进一步研究其代谢和代谢酶奠定基础。关键词：GC．MS；安定；人肝微粒体；Wistar大鼠肝微粒体；代谢物中图分类号：0657．63文献标识码：A文章编号：1000-0720(2014)01-0064一O5安定(Diazepam)属于苯二氮卓类镇静催眠药，用分子印迹聚合物微球技术(MIMs)和HPLC结具有抗焦虑、镇静、催眠、抗惊厥、抗癫痫及中枢性肌合检测人尿样和血清中的安定及其代谢物去

4、甲安肉松驰作用。该药物具有用量少，药效快等特点J，定；Naggar等使用Sonogel—Carbon修饰电极测定且容易获得，近年来常被不法分子用来实施犯罪。人尿样中安定及其代谢物奥沙西泮。通过动物实安定在体内易代谢，目前关于安定及其代谢物验和体外代谢实验研究安定代谢物的文献较少，实的检测方法报道较多，Tiina等使用GC—MS检测验结果也不尽相同。国内外用肝微粒体主要研究人尿样中安定及其代谢物去甲安定、替马西泮、奥P450酶以及部分药物对安定代谢物的影响，报道沙西泮、5一羟基苯基替马西泮；Yuan等j、Hegs

5、—的代谢物主要是去甲安定和替马西泮；李玉tad等]、和Umezawa等l5使用液相色谱一质谱联兰等报道了安定在生物检材中的部分代谢用法(LC—MS)检测人尿样与血清中安定及其代物；本课题组前期对安定在Wistar大鼠尿液中的谢物去甲安定、替马西泮、奥沙西泮；Wang等使代谢物进行了研究，发现研究结果与报道的存用LC—MS／MS检测人尿样中安定及其代谢物去甲在差异。在此基础上，本文采用肝微粒体体外代谢安定、替马西泮、奥沙西泮以及替马西泮、奥沙西泮研究，SPE／GC—MS鉴定安定在女性混合和Wist—葡萄糖醛酸结合

6、物；Mercolini等使用SPE结合ar大鼠肝微粒体中的代谢物，推测安定在女性混HPLC—uV检测大鼠血浆和脑组织中安定及其合和Wistar大鼠肝微粒体中的代谢途径和代谢特代谢物去甲安定、替马西泮、奥沙西泮；Su等使点，为相关案件的侦破提供参考。收稿日期：2013-06-25基金项目：2013年广西公安科技研究与技术开发项目(GAT2013—2)资助E-mail：gxugfq@sina．corn第1期高凡钦等：气相色谱／质谱联用法鉴定人和大鼠肝微粒体中安定代谢物1实验部分过Oasis~HLB3cc固相萃取小柱

7、(预先依次用1．1仪器、材料与试剂3mL甲醇、超纯水、pH9．2的Tris—HC1缓冲液QP2010气相色谱一质谱联用仪(日本岛津公活化)，用3mL体积分数5％甲醇水溶液淋洗杂司)，配电子电离轰击源(EI)；色谱柱：RestekDB质，弃去淋洗液，离心固相萃取小柱(7000r／min)一5MS石英毛细柱(30m×0．25mm×0．255min，依次用3mL乙醚、3mLV(氯仿)：V(异丙)；3—18R高速冷冻离心机；固相萃取仪(美国醇)=9：1洗脱待测物，合并洗脱液，70℃下氮气SUPELCO公司)；Oasis

8、BHLB3cc固相萃取柱(美吹干，残渣用100L甲醇复溶，供GC—MS(EI)国Waters公司)；TTL—DC型氮吹仪。检测。同时平行作空白试验。安定(公安部物证鉴定中心)；人肝微粒体(女2结果与讨论性混合肝微粒体：25位女性捐赠者的混合肝微粒2．1GC—MS分析结果体，批号：FX008064，20mg／mL，CelsisInVitroTeeh—按“1．2”所述GC—MS条件，对女性