蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨.pdf

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1、4_生旦旦筮呈鲞筮塑旦!』垒兰垦兰!垦兰垒!!墨!pjer2014，v。1．21N。．18·1395·《前沿报道／论著l蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨刘宝琴宗志红李超孔德慧李思。王华芹1．中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，辽宁沈阳1100012．中国医科大学附属第一医院内分泌科，辽宁沈阳110001【摘要】目的：探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezome，BZ)、环氧甲酮四肽(epoxomycin，Epox)、乳孢素(1actacys—tin，Lacta)和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125，对肝癌HepG2细

2、胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制。方法：空白对照、100nmol／LBZ、100nmol／LEpox、500nmol／LLacta和2umol／LMGI32单独或联合50“mol／LSP600125处理HepG2细胞；实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mR—NA表达水平影响，蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响；利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率，Hoechest33258染色检测细胞凋亡率。结果：蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA

3、和蛋白表达水平，而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调。MTT结果显示，SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性；进一步Ho—echst33258染色结果显示，4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为(49．2士3．2)、(58．7±3．5)、(56．8±3．4)和(53．4±3．3)，明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的(7．2士2．8)、(16．7土3．2)、(12．3±2．9)和(11．4±3．O)，P

4、白酶体抑制剂的敏感性。【关键词】肝肿瘤；蛋白酶体抑制荆；硼替佐米；BAG3；JNK；SP600125；HepG2细胞；印迹法，蛋白质中华肿瘤防治杂志，2014，21(18)：1395—1399InfluenceofproteasomeinhibitorsontheexpressionOfBAG3inHepG2cellsanditsmechanismLIUBao—qin，ZONGZhi-hong，LChao，KONGDe．-hui，LfSi。，WANGHua—qin。1．DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，ChinaMedicalUniver

5、sity，Shenyang110001，P．R．China2．DepartmentofEdDcr挖0Z0gyandMetabolism，FirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity，Shenyang110001，P．R．China[ABSTRACT]OBJECTIVE：T0investigatetheeffectofBortezome，epoxomycin，]actacystinandMG132ontheexpres-sionofBAG3inHepG2cellsandtheroleofJNKpathway．METHODS：HepG2cells

6、weretreatedwithvehicleor100nmol／LBortezome，100nmol／Lepoxomycin，500nmol／Llactacystin，2／lmol／LMG132aloneorpretreatedwith50umol／LSP600125．ThemRNAexpressionofBAG3genewasdeterminedbyRT-PCR，andtheproteinlevelofBAG3wasdeterminedbywesternblot．Thesurviva1ratiowasmeasuredbyMTTassay，Hoechst33258stainingandflu

7、orescencemicroscope．RESULTS：ProteasomeinhibitorsBZ，Epox，LactaandMG132canup—regulatethemRNAandproteinlevelofBAG3，yetSP600125caninhibitthelevelofBAG3inducedbyproteasomeinhibitors．TheresultsofMTTdemonstratedth