肉桂多酚对HepG2细胞脂质代谢的影响及其机制.pdf

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1、山东医药2017年第57卷第1期肉桂多酚对HepG2细胞脂质代谢的影响及其机制郑婧(贵州医科大学附属医院，贵阳550000)摘要:目的观察肉桂提取物肉桂多酚对HpeG2细胞脂质代谢的影响并探讨其作用机制。方法培养HepG2细胞，用不同浓度的肉桂多酚处理HpeG2细胞后，分别用油红O染色观察脂质沉积情况及甘油三酯(TG)试剂盒检测TG水平变化;采用q-PCＲ方法检测肉桂多酚处理HpeG2细胞后脂肪酸从头合成相关基因表达水平;HepG2细胞转染siＲNA沉默SIＲT1基因后，用Westernblotting方法检测下游通路蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅

2、酶A羧化酶(ACC)水平以及从头合成相关基因的表达。结果肉桂多酚可有效降低HpeG2细胞内TG水平，下调脂肪酸从头合成关键转录因子SＲEBP-1及其下游靶基因FAS、SCD1mＲNA表达(P均＜0．05);SIＲT1基因沉默后，下游通路蛋白AMPK、ACC及其磷酸化水平明显降低，SＲEBP-1、FAS、SCD1mＲNA表达上调(P均＜0．05)。结论肉桂多酚可有效改善HepG2细胞内脂质代谢，该作用可能是通过SIＲT1-AMPK-ACC通路抑制脂质从头合成实现的。关键词:非酒精性脂肪肝;肝脏脂质代谢;肉桂多酚;HepG2doi:10．3969/j．issn．1

3、002-266X．2017．01．012中图分类号:Ｒ575．5文献标志码:A文章编号:1002-266X(2017)01-0038-03非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一种与胰岛素抵Mix试剂盒(Promega，USA)、PromegaGoScript逆转录抗(IＲ)和遗传易感性密切相关的代谢性肝脏损试剂盒(Promega，USA)、TG试剂盒(Biovision，USA)，β-［1，2］［3］伤。根据著名的“二次打击”学说，肝细胞内tublinAntibody(CST，USA)、辣根过氧化物酶标记的兔脂肪沉积是NAFLD发病的中心环节。近几年来国抗小鼠IgG

4、(弗德，中国)、SIＲT1Antibody(CST，USA)、内外药理研究发现肉桂活性成分具有降糖、调脂、改p-AMPKAntibody(Thr172)(CST，USA)、腺苷酸活化善胰岛素抵抗(IＲ)、扩血管以及抗血小板聚集等作蛋白激酶(AMPK)AMPKAntibody、SIＲT1Antibody［4］用。肉桂多酚是从肉桂皮提取的多酚类物质，具(CST，USA)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)Antibody(CST，有改善人肝癌细胞系HepG2细胞IＲ和细胞内脂肪USA)、p-ACCAntibody(Ser79)(CST，USA)。－80℃［5，6］沉积的作

5、用，其作用机制可能是通过特定的信低温冰箱(Thermo，USA)，核酸/蛋白定量检测仪(Ep-号转导通路影响了细胞内某些与脂代谢相关基因的pendorf，German)，PCＲ扩增仪(ABI，USA)，荧光定量表达。2015年3～7月，本研究通过采用不同浓度PCＲ仪7500(ABI，USA)，高速低温离心机(Thermo，的肉桂多酚处理HepG2细胞，观察处理前后细胞内USA)，电子天平(Mettler-Toledo，Switzerland)。甘油三酯(TG)以及脂质代谢相关基因表达的变化，1．2细胞培养及处理HepG2细胞培养于DMEM旨在从分子水平探讨肉桂

6、提取物改善脂质沉积的生低糖培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素、1%链物学机制。霉素)中。置于37℃、5%的CO2饱和湿度培养箱1材料与方法中培养，取对数生长期细胞用于实验。将处于对数61．1材料HepG2细胞购自中国科学院细胞库(上生长期的HepG2细胞以每孔1×10种于6孔板中。海)。肉桂购于广州同仁堂大药房，取100g粉碎后，分待细胞贴壁24h，更换无FBS的DMEM培养基，加别用50%丙酮、乙醚、不同浓度的乙醇对研磨后的肉桂入游离脂肪酸(FFA)及不同浓度的肉桂多酚，作用粉末进行分离、纯化，冻干后得肉桂多酚提取物约6g。24h后，行相关检测。其他材料有

7、:油酸(Sigma，USA)、棕榈酸(Sigma，USA)、1．3HepG2细胞内TG水平检测先小心轻缓倒DMEM培养基(GIBCO，USA)、青链霉素(GIBCO，去培养液，用PBS轻缓漂洗3次，加4%多聚甲醛固USA)、胎牛血清(GIBCO，USA)、油红O(Sigma，USA)、定30min，双蒸水清洗残留的多聚甲醛，油红O工Trizol(Invitrogen，USA)、PromegaGoTaqPCＲMaster作液染色10min左右后弃去，用75%乙醇或60%38山东医药2017年第57卷第1期异丙醇漂洗，除去多余的染料，再用PBS洗3次，显的影响肉

8、桂多酚可显著减少细胞内脂质沉积，不微镜