补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响.pdf

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1、世界科学技术一中医药现代化★中医研究补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响六田晨，张新雪，张丰丰，赵宗江，程明秀，王颖超，赵敬，吴志奎z(1．北京中医药大学基础医学院北京100029；2．中国中医科学院广安门医院北京100053)摘要：目的：探讨补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠骨髓造血祖细胞增殖分化及其机制的影响。方法：6OCo一射线联合环磷酰胺建立再障大鼠模型，以正常对照组、模型组、康力龙组、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组复方中药灌胃大鼠，制备其含药血清培养正常大鼠骨髓细胞，培养体系中含药血清比例为20％，进行骨髓造血祖细胞集

2、落形成单位(CFU)计数；收集集落细胞，RT—PCR检测红系GA—TA一1mRNA及粒系PU．1mRNA表达。结果：与正常对照组相比，模型组骨髓有核细胞显著减少(P<0．01)，造血祖细胞红系集落形成单位(CFU—E)、红系爆式集落形成单位(BFU—E)和粒单核系造血祖细胞集落(CFU—GM)数目均明显降低(P<0．01)，GATA一1、PU．1mRNA表达显著降低(P<0．01)；与模型组相比，各个治疗组大鼠骨髓有核细胞升高，造血祖细胞CFU—E、BFU—E和CFU—GM数目显著增加(P<0．01)：滋肾生血组CFU—E、BFU—E明显优于益髓生血组(P<0．01

3、)；滋肾生血组CFU—GM优于益髓生血组、温肾生血组。各治疗组GATA一1、PU．1mRNA表达明显高于模型组(P<0．01)；滋肾生血组GATA一1mRNA表达明显高于益髓生血组、温肾生血组(P<0．05)；滋肾生血组Pu．1mRNA表达高于益髓生血组、温肾生血组。结论：补肾益髓生血法可能通过增加GATA一1、Pu．1mRNA表达而促进骨髓造血祖细胞增殖分化，其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。关键词：补肾益髓生血法再障造血祖细胞GATA一1PU．1doi：10．11842／wst．2014．05．023中图分类号：R285．5文献标识码：A再生障碍性贫血(

4、AplasticAnemia，AA)简称再血祖细胞，观察补肾益髓生血法再障大鼠含药血清障，是骨髓造血功能衰竭性疾病，主要表现为全血对骨髓造血祖细胞增殖分化及其机制的影响，进一细胞减少，发病机制有造血干／祖细胞缺陷、造血微步阐明补肾益髓生血法治疗AA的作用机制。环境失衡和免疫异常等，无论何种发病机制起主要1材料与方法作用，造血干／祖细胞数量减少而导致的全血细胞减少是AA的基本特征⋯。鉴于补肾益髓生血法治疗1．1实验材料AA已取得较好的临床疗效，但是其作用机制研究1．1．1动物尚未见报道，故深入研究阐明其疗效机制有重要意清洁级雄性SD大鼠110只，健康，体质量义。本实验

5、在整体动物实验的基础上，体外培养造(200~20)g(北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXR京2009—0007)。收稿日期：2014—02—08修回日期：2014—02—13★科学技术部国家重点基础研究发展(“973”)计划(2010CB5304—06)：基于“肾藏精”的脏象理论基础研究一从障碍性贫血探讨“肾生髓”理论的研究，总课题负责人：王拥军，予课题负责人：吴志奎。★★通讯作者：赵宗江，教授，博士生导师，主任医师，主要研究方向：中西医结合治疗肾病，再生障碍性贫血。[WorldScienceandTechnology~Modernizationo

6、fTraditionalChineseMedicineandMateriaMedwa]10762014第十六卷第五期*Vo1．16No．51．1．2药物是否成功。第3次注射环磷酰胺时，开始灌胃治疗，益髓生血颗粒(简称：益髓生血)(中国中医科益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组按3．5g·kg学院广安门医院，产品批号：20110506)，由熟地、山给药，康力龙组按1．4mg·kg给药，灌胃剂量为萸肉、补骨脂、阿胶、炙黄芪、何首乌等11味中药组1mL·100g一，正常组、模型组大鼠给予等量去离子成；温肾益髓生血浸膏(简称：温肾生血)(中国中医科水灌胃，灌胃用药14天，因环

7、磷酰胺属细胞周期非学院广安门医院制剂)；滋肾益髓生血浸膏(简称：滋肾特异性药物，其细胞毒性作用强烈，所引发的骨髓生血)(中国中医科学院广安门医院制剂)；司坦唑醇片抑制作用迅速，但是可逆性强，故本次实验大鼠共(康力龙，广西南宁百会药业，产品批号：100820)。灌胃药物治疗14天【。1．1．3主要试剂1．2．2制备含药血清及骨髓有核细胞计数∞Co一^y射线(北京大学化学研究所钴源室)，环大鼠第14天灌胃1h后，腹腔注射10％水合磷酰胺(山西普德药业，批号：20101103)，IMDM培氯醛(0．35mL·100g)麻醉。股动脉取血8～l0养基(GIBCO，批号：0