皮下免疫热休克蛋白65对小鼠巨噬细胞胆固醇流出率的影响及机制.pdf

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1、中华老年心脑m管病杂志2014年4月第16卷第4期ChinJ(．)eriatrHeartBrainVesselDis，Apr2014，Voll6，No4基础研究．皮下免疫热休克蛋白65对小鼠巨噬细胞胆固醇流出率的影响及机制孙海阁，沈剑刚，谭迎，田迪，刘挺榕，罗甜甜，赖文岩，郭志刚摘要：目的观察皮下免疫不同剂量热休克蛋白65(HSP65)对栽脂蛋白E缺失小鼠动脉粥样硬化及巨噬细胞TC流出率的影响。方泼选择apoE小鼠24只，随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、5gHSP65纽及25“gHSP65组，每组8只，第3、6周进行皮下免疫。实

2、验第l6周末取标本，分离小鼠主动脉测定血管斑块面积；用自动生化仪测定小鼠血脂水平，酶联免疫吸附法分别检测血清HSP65抗体滴度及炎性因子白细胞介素l0(II10)和干扰素7水平，液闪计数仪检测巨噬细胞TC流出率；提取肝脏mRNA及膜蛋白，分别检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族I型清道夫受体(SR—BI)的表达。结果与PBS对照组比较，5gHSP65组和25“gHSP65组Tc流出率明显降低，HSP65抗体滴度和干扰素水平明显升高，主动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0．05，P<0．01)；其中25g

3、HSP65组血清HDIc和II一10表达较PBS对照组明显降低(P<0．01)；5IzgHSP65组和25“gHSP65组ABCA1、ABCGl及SRBfmRNA表达明显低于PBS对照组(P<0．05)。结论皮下免疫HSP65可抑制小鼠巨噬细胞Tc流出，可能是通过下调ABCA1、ABCG】和sRl3I的表达。关键词：热休克蛋白质类；载脂蛋白E类；巨噬细胞；动脉粥样硬化；白细胞介素10；干扰素Ⅱ型EffectofsubcutaneousimmunizationwithHSP65oncholesteroleffluxfrommacrOph

4、agOcytesinmiceanditsmechanismSUNHai—ge，SHENJian—gang，TANYing，etal(Departmento厂Cardiology，Af．1iliatedNanfangHospitalo，’SouthernMedicalUniversity．Guangzhou510515。GuangdongProvince，China)Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofsubcutaneousimmunizationwithHSP65onatheroscle—rosi

5、sandcholesteroleffluxfrommacrophagocytesinapoE／miceanditsmechanism．MethodsTwenty—fourapoE／miceaged8weekswererandomlydividedintoPBSgroup(controlgroup)，5／2gHSP65groupand25肛gHSP65group(8ineachgroup)．FheanimalsunderwentsubcutaneousimmunizationwithHSP65atweeks3and6．Sampleswe

6、retakenatweek16．Areaofatortaplaques，serumlipidlevel，serumHSP65antibodytiter，andII一10andinterferon7levelweremeasuredbyEIISA．Cholesteroleffluxwasassayedbyliquidscintillationspectrometry．Expres—sionsofABCA1，SR—BTandABCG1mRNAandproteinweredetectedbyRT～PCRandWesternblot，resp

7、ectively．ResultsThecholesteroleffluxwassignificantlylower，theserumHSP65anti—bodytiterandinterferon)'leve1weresignificantlyhigher，theareaofatortaplaqueswassignifi—cantlylargerin5gHSP65groupand25gHSP65groupthanincontrolgroup(P

8、，andABCA1，ABCG1andSR—BImRNAandpro—teinweresignificantlylowerin5／2gHSP65groupand25肛gHSP65groupthanincontrolgrou