牛蒡子苷元对小鼠脾细胞增殖的影响及相关机制.pdf

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1、·726·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6)牛蒡子苷元对小鼠脾细胞增殖的影响及相关机制陆明，姬飞虹，张林杰O摘要目的研究牛蒡子苷元(ATG)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响及其可能的分子机制。方法MTF法检测ATG对小鼠脾细胞的毒性；H3一胸腺嘧啶核苷掺入法检测ATG对小鼠脾细胞的增殖抑制水平；ELISA法检测细胞因子干扰素(IFN一)和白介素2(IL-2)的分泌水平；Westernblot法

2、检测mTOR通路相关蛋白(mTOR、P70S6K、Akt、AMPK、Raptor)的表达及磷酸化水图1Arctigenin结构平。结果ATG对小鼠脾细胞无显著毒性；ATG显著抑制了ConA诱导的小鼠脾细胞增殖；ATG显著减少了小鼠脾细海斯莱克实验动物有限公司；PRMI1640细胞培养胞上清液中淋巴因子IFN．和IL一2的含量，且具有浓度依赖基购于美国Gibco公司；青霉素、链霉素、吐温20、性；ATG显著降低了mTOR和P70S6K的磷酸化水平，增加完全蛋白酶抑制剂、细胞裂解液、丽春红、二甲基亚了上游

3、AMPK和Raptor的磷酸化，而Akt的磷酸化水平没有明显变化。结论ATG可显著抑制ConA诱导的小鼠脾细砜(DMSO)均购于美国Sigma—Aldrich公司；ELISA胞增殖并减少IFN-．',／、IL一2的分泌，该作用可能与其增强试剂盒购于上海依科赛公司；BCA蛋白定量试剂盒AMPK、Raptor的磷酸化，抑制mTOR、P70S6K的磷酸化有购于美国Thermo公司；GAPDH抗体购于华安生物关。公司；AMPK、P—AMPK、Raptor、p-Raptor、mTOR、关键词牛蒡子苷元；细胞增殖

4、；IL一2；IFN一；mTORP—mTOR、P70S6K、p-P70S6K、Akt、p-Akt抗体均购于中图分类号R285．5；R329．25美国CellSignalingTechnology公司；蛋白预染Mark-文献标志码A文章编号1000—1492(2014)06—0726—05er、一抗稀释液、辣根过氧化物酶标记的二抗、ECL化学发光液购于碧云天公司；硝酸纤维素膜购于美牛蒡子在中国传统中药中具有抗炎利尿排毒的国Millipores公司。作用⋯，而其单一化合物提取物牛蒡子苷(arctiin，1．

5、2方法AC)或牛蒡子苷元(Arctigenin，ATG，图1)亦具有免1．2．1BALB／c小鼠脾细胞原代培养配制含疫抑制功能和抑癌功能J，但ATG的免疫抑制机10％胎牛血清、110mg丙酮酸钠、20mmol／L制尚不明确。mTOR作为一种保守的丝／苏氨酸激HEPES、100U／ml青霉素、0．1mg／ml链霉素的1L酶，可以促进细胞蛋白质的翻译并促进细胞从G．期PRMI1640培养液(pH7．2)。处死6～8周小鼠取进入s期，与细胞增殖、生存和代谢密切相关，并参与了免疫细胞激活和增殖J。该研究通过观

6、察脾脏，置于冷PBS中，研磨，过200目筛网，1200r／min离心5min，去上清液，沉淀加入红裂液1ml／ATG对小鼠原代脾细胞的作用，检测roTOR通路的脾，混匀，静置1min，加入PBS离心，再加入PBS，过相关改变，探索ATG的免疫抑制机制。膜，1200r／min离心5min，所剩细胞洗涤1～2次，11材料与方法ml1640打散离心后的沉淀(10l细胞悬液+190l台盼蓝，取10l计数)。1．1材料ATG购于上海源叶生物；雷帕霉素(ra—1．2．2MTF测ATG的细胞毒性用RPMI1640将

7、pamycin，RAPA)购于上海生工；BALB／c小鼠购于上小鼠原代脾细胞调成4X10。个／ml，在96孔板中，2014一叭一15接收每孔加100l细胞悬液(4X10个细胞)，501培基金项目：安徽省教育厅自然科学基金(编号：KJ2011A167)养液和50txlATG(终浓度为200、100、50、25、12．5、作者单位：‘安徽医科大学免疫学教研室，合肥2300326．25ixmol／L，RPMI1640溶解，对照组为培养液)，上海市勤浩生物科技有限公司，上海201203各浓度设3个复孑L，另设

8、置3个不加细胞和药物(用作者简介：陆明，男，硕士研究生；培养基替代)的调零孔，37℃、5％CO孵箱中培养张林杰，男，教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：zlj33@ahmu．edu．cn48h，培养结束前4h加20lMTT(母液5mg／m1)，·730·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6)应用基因芯片技术筛选转染CDX2基因后胃癌细胞差异表达基因陈晓双，秦蓉，储婧，陈宗科摘要目