慢性复合应激致老年小鼠学习记忆损伤及机制研究.pdf

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1、·1466’安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Dec；48(12)◇预防医学研究◇慢性复合应激致老年小鼠学习记忆损伤及机制研究程娟，王涛涛，唐伟，姚余有摘要目的探讨慢性复合应激对老年小鼠学习记忆能力1材料与方法的影响及可能机制。方法以老年小鼠为研究对象，实验分成应激组和对照组。采用Morris水迷宫试验观察慢性应激1．1材料对老年小鼠学习记忆的影响；通过HE染色观察海马CA3区1．1．1实验动物清洁级，健康昆明种小鼠，雄性，神经元病理组织形态；采用We

2、sternblot法检测小鼠海马1310月龄，60只，体质量35～40g，由安徽医科大学实位淀粉样前体蛋白裂解酶l(BACEI)和13淀粉样蛋白1_42验动物中心提供。饲养至18月龄。饲养条件：小鼠(A13．)的表达量；运用EL1SA法检测血清皮质酮(CORT)饲养遵循安徽医科大学生物医学伦理委员会的要含量。结果与埘照组相比，实验组老年小鼠逃避潜伏期和求，室温(22-4-1)oC，相对湿度50％，自由摄食饮水，游泳距离延长(P<0．01)；CA3区海马神经元数目明显减少将老年小鼠随机均分为应激组和对照组。(

3、P<0．01)，排列疏松紊乱，脱失现象明显，核固缩，浓染；海1．1．2主要试剂与仪器p—actin单克隆抗体、p位马A13。和BACEI蛋白的表达量升高(P<0．01)；血清淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)单克隆抗体(美CORT浓度升高(P<0．01)。结论慢性应激可导致老年小国，SantaCruz公司)；a[3。(北京博奥森公司)；鼠学习记忆能力下降和海马组织损伤，其机制可能与慢性应Westernblot法化学发光检测试剂盒(美国，Pierce激引起老年小鼠BACE1升高，促进A13生成有关。关键词慢

4、性应激；海马；B淀粉样蛋白；皮质酮；学习记忆公司)；电泳仪(北京六一仪器厂)；Morris水迷宫图中图分类号R338．64像采集及分析系统(北京医学科学院药物研究所)；文献标志码A文章编号1000—1492(2013)12—1466—04凝胶成像分析系统(深圳HEMA公司)。1．2方法应激对大脑功能的影响是神经科学研究的热点1．2．1应激方法慢性复合应激方法：待小鼠生长问题，有研究¨证实，当人或动物处于强烈的急性至l8月龄时，分别采用低温暴露(4eC，10min／d)、应激或长期慢性应激的状态时，其大脑功能

5、(如学束缚(3h／d)、40qC环境(10min／d)、振荡[水平振习记忆等)可受到明显损害。但有关慢性应激影响荡频率(2Hz，10min／d)]、夹尾(5min／d)、冰水游大脑学习记忆功能的分子机制研究目前较少。以往泳(5rain／d)、45。倾斜笼子(12h／d)、浸泡笼子(12h／d)、社会接触(由独笼改为5～6只小鼠合笼)(24研究显示，慢性应激可明显引起机体的糖皮质激素(glucocorticoids，GCs)水平升高，且高浓度GCsh／d)、空笼(12h／d)、夜相给亮(12h／d)、禁食水(

6、24h／d)等12种方式。每天随机采用1种方法对可增加体外培养的N2a成神经细胞瘤细胞的B淀小鼠进行应激刺激，上述刺激持续8周。粉样蛋白(amyloidbeta—protein，AB)水平。现已1．2．2学习记忆能力测试Morris水迷宫直径120公认A[3能引起海马神经元损伤，慢性应激对小鼠Cln，高30em，圆形水池，内壁被漆成黑色，水深2O学习记忆功能的影响是否与慢性应激促进海马组织elTI，水温(25±1)oC，分为4个象限，在Ⅳ象限正中113生成有关，尚不清楚。因此，该研究拟用老年小距离池壁30e

7、m处放一直径8em的黑色平台，平台鼠，探讨慢性应激对老年小鼠学习记忆能力影响及低于水面1cm。大鼠运动轨迹由迷宫上方连接于可能机制。显示系统的摄像机采集。实验时，水温保持在20～2013—06—20接收22℃。定位航行实验动物接受7d训练前，已经适基金项目：安徽省自然科学基金(编号：1208085MH145)；安徽高校应记录环境。每组随机选l0只小鼠做此实验历时省级自然科学研究项目(编号：KJ2011z161)7d，每天随机选择1个象限，大鼠面向池壁放入水作者单位：安徽医科大学公共卫生学院，合肥230032

8、中，观察大鼠登上平台所需时间(逃避潜伏期)，60S作者简介：程娟，女，硕士研究生；姚余有，男，副教授，硕士生导师，责任作者，E—mail：yaoan-内找到平台允许其在平台上休息1Os，如果60S未qi7l@yahoo．C01~1．cn找到平台，缓慢引导至平台并允许其在台上休息10·1468·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2013Dec；48(12)2．3慢性复