TSC1和CDX2蛋白在胃癌中的表达及临床意义.doc

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1、TSC1和CDX2蛋白在胃癌中的表达及临床意义［摘要］目的：检测TSC1及CDX2蛋白在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达水平，并初步探讨其对于胃癌的临床意义。方法收集新鲜胃癌及正常胃粘膜组织标本各50例并提取组织蛋白。利用western-blot方法检测TSC1和CDX2蛋白在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达水平及阳性表达率。结果在正常胃粘膜组织中均可检测到TSC1蛋白的表达,而检测不到CDX2蛋白的表达。在本实验收集的胃癌组织中TSC1及CDX2蛋白的表达阳性率分别为54%和65%。且表达水平与T分期、分化程度有关。结论TSC1蛋白及CDX2蛋白在胃癌的发生发展中发挥重要作用

2、。检测二者在胃癌中的表达对于分析胃癌的恶性程度并判断预后有很高的临床价值。［关键词］TSC1蛋白；CDX2蛋白；胃癌引言：在我国，胃癌的发病率和死亡率均占恶性肿瘤首位。因此，胃癌的早期诊断、确切分期、及时治疗以及判断对治疗的敏感性非常重要。TSC基因即结节性硬化基因是一种肿瘤抑制基因，是首先在结节性硬化综合征(TSC)中发现的，其具有抑制细胞生长的作用，同源异型盒基因CDX2(caudal—relatedhomeoboxgene)表达产物广泛存在于胚胎的消化道腺上皮中，CDX2基因的发现源自果蝇，属于DNA结合蛋白大家族，具有维持果蝇形态和肠道发育的作用。在人类，同源异型盒基因

3、不仅控制着胚胎细胞的分化和增殖，而且在成人组织的发育和分化调控中也起着重要作用。Mali。Gv等［1］研究发现CDX2mRNA在85%的结直肠癌中表现出下调,从而推测CDX2确为一种肿瘤抑制基因。近年来，国内外关于CDX2蛋白在胃癌中的研究有一定报道，但结果不一。本研究应用western—blot方法检测TSC1和CDX2蛋白在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达情况并分析其临床意义。1材料和方法1.1材料胃癌组织及正常胃粘膜组织标本：于济宁市第一人民医院和青岛大学医学院附属医院收集2011.06-2011.09胃腺癌根治术手术新鲜标本50例（病灶周边处的胃癌组织及距病灶大于5cm

4、以外的正常胃粘膜组织），均未行术前放化疗及其它抗肿瘤治疗，一80°C保存。其中高分化腺癌1例，中分化腺癌15例，低分化腺癌34例；T1-2者21例，T3-4者29例；N0者5例,N1-3者45例。1.2试剂DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶等细胞培养用试剂购自GTBCOBRL公司；western—blot试剂：一抗：兔抗人TSC1单克隆抗体，购自美国Santcruz生物制剂公司。兔抗人8—actin,购自北京博奥森生物制剂公司。兔抗人CDX2单克隆抗体，购自广州齐云生物技术有限公司。二抗：辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗，购自北京博奥森生物制剂公司。发光液BeyoECLPlus：购自上

5、海碧云天生物技术有限公司。1.3方法提取组织蛋白：称取组织标本约50mg,加Lysisbufferl00-150ul,组织剪剪碎，研磨棒研磨，低温离心机离心12000「pm,lOmino吸取上清即为提取的蛋白样品。按照BCA蛋白分析试剂盒标准步骤进行蛋白定量。进行蛋白的SDS-PAGE电泳和转膜。进行封闭孵育一抗二抗。取等体积的ECL试剂A液、B液混和进行蛋白检测。在暗室中显影、定影，并覆盖X光胶片，曝光。晾干后，采用BT0-RAD2000型凝胶成像系统扫描，对条带进行吸光度分析，检测结果以与各自内对照P-actin条带吸光度比较后的比值表示。比值大则表明组织中蛋白表达高。1.

6、4统计学处理采用SPSS17.0进行统计分析，实验数据以x±s表示，两组之间均数差别应用t检验进行统计学比较。认为pVO.05具有统计学意义。2结果在本实验收集的50例胃癌及正常胃粘膜组织标本中，分别提取蛋白质，通过Western-Blot法检测TSC1蛋白及CDX2蛋白的表达。结果发现,在正常胃粘膜组织中，均能检测到TSC1蛋白的表达。而在胃癌组织标本中，TSC1阳性表达率为54%,而呈阴性表达的23例多为分化差、T分期较晚的患者；且表达水平也与分化程度、T分期及淋巴结转移有关。而CDX2蛋白在正常胃粘膜组织标本中检测不到其表达，在本实验收集的胃癌组织中，有65%的阳性表达，

7、且其表达水平与分化程度及T分期有关，与淋巴结转移情况无关。表1TSC1蛋白在不同胃癌中表达水平的比较表2CDX2蛋白在不同胃癌中表达水平的比较3讨论TSC基因为肿瘤抑制基因[2],其与肿瘤的发生发展密切相关，与恶性肿瘤的治疗及转归有重要关系。TSC基因可影响细胞周期的进程。在多种恶性肿瘤中均可见PI3K/Akt/mT0R/S6K信号传导通路的活化。而TSC基因是PI3K/Akt/mT0R/S6K信号传导通路的关键环节。上述信号传导通路通过影响肿瘤细胞生长、生存、分化和血管生成在肿瘤的发生发展