经颅磁刺激对脑出血大鼠学习记忆能力及GAP-43表达的影响.pdf

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1、246Neura1InjuryAndFunctionalReconstruction．May2014，Vo1．9，No，3·基础研究·经颅磁刺激对脑出血大鼠学习记忆能力及GAP．43表达的影响张运康，陶连方作者单位摘要目的：观察经颅磁刺激(TMS)对脑出血大鼠学习记忆能力及GAP．43表达的影响。方法：健康成年雄湖北医学院附属十堰性SD大鼠4O只随机分为正常组、假手术组、模型组及TMS组，各10只；建立脑出血模型；TMS组于造模市人民医院老年病科后24h开始给予TMS治疗，1次／d，连续治疗14d；采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力，免疫组

2、化法检测血肿周围组织GAP．43阳性细胞情况。结果：TMS组大鼠学习记忆能力明显较模型组改善(P<0．01)；湖北十堰441000TMS组血肿周边GAP一43阳性细胞显著多于模型组(P<0．01)；4组均未见自发性出血及癫痫发作。结论：收稿日期TMS可改善脑出血大鼠学习记忆能力，TMS治疗后，血肿周围GAP．43表达上调。2O14．O3．11关键词脑出血；经颅磁刺激；Morris水迷宫；生长相关因子一43通讯作者中图分类号R741；R741．05文献标识码ADOI10．3870／sjsscj．2014．03．025陶连方taolianf@126．c

3、om经颅磁刺激(transcranialmagneticstimulation，开3．2rnlTl，钻孑L，向下进针5．6ml'n，以微量注射器TMS)是一项无痛、无创、操作简单且安全可靠的神缓慢向右侧苍白球注射含有0．2u／LVII型胶原酶经电生理技术，目前不仅在运动神经功能完整性诊的生理盐水2IxL，留针5min。正常组不做任何处断中广泛应用，而且还在治疗脑梗死、帕金森病、癫理。假手术组用同样方法钻孑L、进针，2txL无菌生理痫及抑郁症等方面均取得了较好的疗效『1_，但其在盐水替代胶原酶注射。模型组与TMS组制作脑出脑出血中运用报道尚少。本研究

4、旨在观察TMS对血模型。脑出血大鼠学习记忆能力及血肿周围生长相关因1．2．2TMS治疗TMS组大鼠于造模24h后开始子(growth．associatedfactor-43，GAP．43)表达的影用行TMS治疗，固定大鼠头部，线圈水平放于实验响，以探讨其可能的作用机制，为临床应用TMS治大鼠头部上方，线圈中心准确对于右侧头颅中央，疗脑出血提供一定的实验基础。刺激频率0．5Hz，脉冲磁场峰值强度1．44T，连续刺激60次，每天治疗1次，连续治疗14d。1材料与方法1．2．3学习记忆能力测定治疗14d后，采用1．1材料Morris水迷宫对各组大鼠的空间

5、学习记忆能力进行1．1．1实验动物及分组健康雄性成熟SD大鼠40测试。Morris水迷宫水温控制在(25~2)℃，平台高只，购于华中科技大学同济医学院实验动物中心，于逃逸平面2cm，周围设置在实验时一致。按水池体质量(220~20)g；大鼠随机分为正常组、假手术4个象限分别将实验大鼠置入水池，大鼠若在60S组、模型组及TMS组，每组10只；各组均予以自由内寻找到目标平台且在平台上停留I5S则将其捞饮水及正常喂养。起，取大鼠从象限出发到寻找到目标平台所需的时1．1．2主要试剂与材料VII型胶原酶(购于美国间，称为逃避潜伏期；若大鼠不能在60S内寻找到

6、sigma公司)；STOELTINGTL．2型鼠脑立体定位仪目标平台，由实验者将其引导至平台，停留在平台(购于美国Stoelting公司)；Morris水迷宫，上15S后将其捞起，逃避潜伏期记为60S。依据上Ethovision系统(购于荷兰Noldus公司)；鼠抗兔免述方法每天训练4次，连续训练5d，用第6天记录疫组化(DAB)试剂盒(购于北京欣博盛生物科技公的结果评定其空间学习记忆能力。司)；兔抗GAP．43抗体(购于武汉博士德生物工程1．2．4血肿周围GAP一43蛋白的表达水迷宫测试有限公司)；微量进样器、手术剪、手术镊等手术器结束，处死大鼠

7、，断头取脑后固定于4％多聚甲醛内械(购于上海医疗器械厂)；10％水合氯醛(十堰市人过夜固定，置人30％蔗糖溶液，待组织沉底后进行民医院药剂科提供)。切片。每只大鼠脑组织均取同样层面的切片放入1．2方法3％H20：溶液中1h；滴加正常羊血清封闭30rain；1．2．1脑出血模型建立参照Rosenberg法嘲制作脑滴加一抗后4℃下孵育24h；再滴加相应二抗工作出血模型，10％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后将其液，室温下反应30min，加辣根酶标记卵白素工作固定在鼠脑立体定位仪上，根据《大鼠立体定位图液，室温孵育30min；新鲜配制的DAB显色剂显谱》嗍进行

8、苍白球定位：前囟后1．4l1ln1，中线右侧旁色，显微镜下控制反应时间；蒸馏水洗涤3次终止248NeuralInjuryA