非小细胞肺癌患者共刺激分子mRNA的表达及意义-论文.pdf

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1、．2568．奎堕堂兰!月第3鲞箜G—uangd—ongMedic—al—JournalAug．2014，Vo1．35，N'ov_16非小细胞肺癌患者共刺激分子mRNA的表达及意义祁松楠，钱忠萍，赵瑞珂，凌晨，王琳，蒋敏，史进方，顾国浩，吴静苏州大学附属第一医院检验科(江苏苏州215006)；江苏省盐城市妇幼保健院检验科(224002)【摘要】目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者共刺激分子CD28、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA一4)、程序性死亡分子一1(PD一1)、程序性死亡配体一1(PD—L1)

2、mRNA的表达及意义。方法采用Taqman探针实时荧光定量PCR方法检测50例NSCLC患者、30例肺良性疾病患者及50例健康z．~l-周血共刺激分子CD28、CTLA一4、PD一1、PD—L1mRNA的表达水平。结果与健康人相比，NSCLC及肺良性疾病患者CD28mRNA表达显著降低(P<0．O1)，PD一1mRNA表达显著增加(P<0．01)，CTLA一4mRNA及PD～L1mRNA表达差异无统计学意义(P>0．05)，与肺良性疾病患者相比，NSCLC患者4项指标差异无统计学意义(P>0．05)；Ⅲ+

3、IV期NSCLC患者CD28mRNA表达低于I+Ⅱ期患者(P<0．05)，有淋巴结转移的NSCLC患者CD28mRNA表达低于无淋巴结转移的患者，PD一1mRNA表达高于无淋巴结转移的患者(P<0．05)。结论NSCLC患者137一CD28家族分子表达异常是其免疫功能紊乱和疾病恶化进展的重要原因。【关键词】共刺激分子；非小细胞肺癌；实时荧光定量PCR；mRNA肺癌的发生发展与机体免疫功能紊乱密切相关。性阻塞性肺病)患者30例(肺良性疾病组)，其中男20在其免疫应答中T细胞活化需要双重刺激信号：第一例，女1

4、0例，年龄(65．2±5．9)岁。预防保健科体检健信号由T细胞表面受体(TCR)识别抗原提呈细胞康者50例(健康对照组)，其中男28例，女22例，年龄(APC)表面的MHC一抗原肽复合物所启动；第二信号(58．5±6．3)岁。患者均知情同意。各组年龄、性别差由T细胞和APC问共刺激分子的相互作用所启动。异无统计学意义(P>0．05)。经典的B7一CD28家族协同刺激途径对细胞的活化和1．2主要仪器及试剂Ficoll淋巴细胞分离液(上海耐受起关键性调节作用。研究表明B7一CD28分子家恒信化学试剂公司)，T

5、rizol试剂(Ambion公司)，RNA族与非小细胞肺癌(NSCLC)的发生有重要关系。逆转录试剂盒(天根公司)，RealMasterMix试剂盒(天我科已成功建立了检测外周血共刺激分子mRNA表达根公司)，GeneAmpPCRSystem9700扩增仪(美国ABI的方法，通过检测共刺激分子mRNA的表达来评价机公司)、LightCycler480Ⅱ扩增仪(Roche公司)，Thermo体免疫功能状态。目前，有学者采用流式细胞Spectronic紫外分光光度计(美国Spectronic)，Eppendo

6、rf—术检测NSCLC患者共刺激分子在单个核细胞表面的centrifuge5430R低温高速离心机(德国Eppendorf公司)。表达情况或检测血浆中可溶性共刺激分子的表达，而1．3方法有关NSCLC患者共刺激分子在转录水平表达情况的1．3．1外周血单个核细胞分离于肺癌患者治疗前报道很少。本研究采用实时荧光定量PCP技术从基因采集空腹静脉血3mL，肺良性疾病及体检健康者采集转录水平探讨共刺激分子CD28、细胞毒T淋巴细胞相空腹静脉血3mL，EDTA—Na，抗凝。取Ficoll淋巴细关抗原4(CTLA一4)

7、、程序性死亡分子一1(PD一1)、程胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司)3mL于试管序性死亡配体一1(PD—L1)在NSCLC患者中的表达中，将稀释好的外周血用一次性滴管吸取后，小心沿管和临床意义，为NSCLC的免疫功能评价和免疫治疗提壁缓缓加入淋巴细胞分离液中，水平离心机2000r／min供依据。离心20min后取出，用一次性滴管吸取中间层云雾状1资料与方法单个核细胞于1．5mL离心管中，10000r／min离心1．51．1一般资料收集2013年9月至2014年1月苏州rain，弃上清液，加入1mL生理

8、盐水，颠倒混匀，10000大学附属第一医院收治的初诊NSCLC患者50例r／min离心1．5min，弃上清液，加入RNAisoRegent混(NSCLC组)，其中男31例，女19例，年龄(63．1±匀，一80℃低温冰箱保存备用。7．8)岁，所有患者均经组织病理学检查确诊，其中鳞癌1．3．2总RNA提取加200氯仿，猛烈颠倒2021例，腺癌29例，根据国际抗癌联盟(UICC)TNM分次，冰浴5rain，4℃，12000r／min