马尾松树皮提取物对顺铂所致体外人胚肾细胞毒性的保护作用-论文.pdf

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1、第38卷第17期2013年9月囊烹Nesea杂teriaM志ed~caVoS1e．p3t8em，Ibsseure，20173马尾松树皮提取物对顺铂所致体外人胚肾细胞毒性的保护作用冯冬茹，戴青辰，谢衡。，李若达，郑光耀，王金发，王宏斌(1．中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东广州510275；2．广东嵩珍营养源研究所，广东广州510645)[摘要]目的：体外探讨马尾松树皮提取物(PMBE)对顺铂所致肾毒性的保护作用，并初步探究其作用机制。方法：体外培养人胚肾细胞HEK293，用四甲基偶氮噻唑蓝(MTF

2、)方法分别检测PMBE、顺铂对HEK293细胞生长的影响，以及PMBE对顺铂所致HEK293细胞毒性的保护作用；并检测各组细胞内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量，以及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和硫氧还蛋白酶(TrxR)的活性。结果：PMBE低浓度下促进HEK293细胞生长，较高浓度下对细胞产生轻微毒性；Jt~n抑制HEK293细胞生长，使细胞内ROS，MDA含量升高，GSH含量降低，同时降低SOD，CAT和TrxR酶活性；加入PMBE预保护后，在一定范围内降低顺铂对HEK293

3、细胞的损伤，降低ROS，MDA含量，升高GSH含量，以及提高SOD，CAT和TrxR酶活性。结论：一定浓度的PMBE对顺铂所致人胚肾细胞的毒性有保护作用，其机制可能与PMBE的抗氧化性密切相关。[关键词]马尾松树皮提取物；顺铂；人胚肾细胞；肾毒性；抗氧化性顺铂是临床上广泛使用的化疗药物之一，但顺储存。使用前，用10％FBS．DMEM培养液配成不同铂严重的肾毒性是限制其临床应用的主要因素，机浓度的处理液)；顺铂(TCI，13本东京化成工业株式制可能与其引起的过氧化反应有关。近几年的会社，纯度>95．0％，用PBS配制溶解后用0

4、．22Ixm研究表明，抗氧化剂对顺铂的肾毒害有明显的保护的过滤膜过滤，密封避光4℃保存备用)；人胚肾细作用_3J。马尾松树皮提取物(Pinusmassonianabark胞HEK293(中山大学医学院动物细胞中心)；胎牛extracts，PMBE)的主要活性成分是原花青素，由单血清(FBS)、胰蛋白酶、DMEM、青链霉素和维生素C体、寡聚体和多聚体等天然类黄酮组成的混合(VitC)(Gibco公司)；活性氧(reactiveoxygenspe—物』。本实验室已经证明马尾松树皮提取物具有cies，ROS)和过氧化氢酶(cata

5、lase，CAT)检测试剂抗氧化以及清除自由基的能力J，但是对其在顺铂盒(碧云天公司)；NADPH和胰岛素(普博公司)；肾毒性保护上的应用还未见报道，基于此，本研究以MTr，DTNB和小鼠肝脏TrxR(Sigma—Aldrich)；E．人胚肾细胞HEK293为研究材料，旨在重点研究coliTrx为本实验室从质粒中分离纯化；超氧化物歧PMBE是否对顺铂引起的肾毒性具有保护作用，并化酶(superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondi—初步探究其作用机制。aldehyde，MDA)和谷胱甘肽(glutat

6、hione，GSH)测定1材料与方法试剂盒(南京建成生物工程研究所)。1．1药物与试剂马尾松树皮提取物(PMBE，由1．2细胞培养细胞用含10％FBS和1％青链霉广东省嵩珍营养研究所提供，用DMSO配成100g·素的DMEM培养液培养，置于37oC，5％CO的培L的贮存液，并用0．22Ixm的过滤膜过滤，一20℃养箱中，用0．25％胰蛋白酶消化传代，2～3d传代1次，以维持细胞处于对数生长期。[收稿日期]2013~1-161．3细胞存活率检测实验顺铂对HEK293细胞[基金项目]广东省工业攻关计划项目(21304b10401

7、033)；广东省自然的毒性作用：取对数期的细胞，消化后吹打成单细胞科学基金项目($2012010010533)；中山大学教务处教改项目(100035)悬液，以1×10"~iVmL接种于96孔板。待细胞生长[通信作者]王宏斌，教授，Tel：(020)84039179，E—mail：wanghb@mail．sysu．edu．CB至融合状态，加入不同浓度顺铂(终浓度分别为0，[作者简介]冯冬茹，博士，E—mail：lssfdr@mail．sysu．edu．cn0．015，0．030，0．060，0．120，0．240，0．480，

8、0．960，·2868-第38卷第17期2013年9月<中China圈Journ。烹nese~杂teriaMa志dlcaVoS1e．p3t8em，Ibsseure，2011731．920，3．840mmol·L)。培养24h后，每孔加入min离心8min收集细胞。冰浴中超声破碎细胞，5g·