资源描述：
《吸烟小鼠气道上皮细胞凋亡与有关癌基因蛋白表达的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、孝感职业技术学院学报~e.2年000期合刊总第8一刁期Z1吸烟小鼠气道上皮细胞凋亡与有关癌基因蛋白表达的研究许三林汤光宗钱敏玉舒再璋哈建利、,:,摘要目的通过观察吸烟小鼠气道上皮细胞凋亡与Myca表达的动态变化F一、.烟致cmycfa,癌基因活化对小鼠气道上皮细胞凋亡的影响:探讨吸方法应用免疚组织,.化学SABC法和脱氧核普酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNE助技术检测不同阶段、,.不同别量吸烟时间小鼠气道上皮细胞MycFas表达和细胞调亡并进行彩色图像分析、,:结果小鼠吸烟4周12周时气道上皮细胞Myc和Fas表达及细胞凋亡的面密度与对照组,.,比较明显上调(
2、P0<.01)吸烟别量加倍时其上调更为明显吸烟8周时Myc和Fas表达.一、细胞凋亡的面密度与对照组之间无显著差异(P>0.05)结论:烟致cmycfa:癌基及吸.因活化诱导气道上皮细胞凋亡可能参与COPD的发生和发展关键词细胞凋亡癌墓因相关蛋白吸烟气道上皮,细胞凋亡(cenaPOPtosis)是细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后主动参与的由一些凋亡相关基因相互作用的细胞死亡过程。该过程不仅受许多生化因素的影响,还受许。,,多癌基因表达的精确调控迄粗吸烟作为一种刺激因子是引起c0PD的主要原因之一我,,国每年因COPD死亡的人数达100万致残人数达50一100
3、万⑧但对其发生的细胞及分子机制还很不清楚。我们在吸烟动物实验中发现,吸烟不仅导致气道上皮细胞变性、坏死,。、④而且伴有气道上皮细胞的凋亡目前关于吸烟致小鼠气道上皮细胞凋亡与MycF朋表。达的研究国内外尚未见报道本研究采用脱氧核昔酸转移酶介导的缺口末端标记(,、TUNEL)技术和免疫组织化学SABC法检测不同阶段不同剂量吸烟时间小鼠气道上皮、。、细胞凋亡和MycFas表达的动态变化探讨吸烟致MycFas表达诱导气道上皮细胞凋亡。在COPD发生过程中的作用材料与方法、一实验动物香烟烟雾吸入实验,,,健康昆明小白鼠80只雌性体重1-8209(购于同济医科大学实验动物学
4、部)每组,。,,8只共分10组设不吸烟对照组3组香烟烟雾吸入实验6组余下一组动物在首次吸烟前处死作为正常对照组。实验用烟为市售红双喜牌过滤嘴香烟(武汉卷烟厂制),尼古丁,。,含量1毫克l支焦油含量18毫克/支采用自制小白鼠实验性吸烟装置每次燃烧4支卷,,,,。烟每支10分钟换烟时停止吸烟5分钟共需l小时其中3组每天吸烟1次为吸烟l·.67,,。,,组另外3组每天吸烟2次为吸烟n组中间间隔4小时每周6天连续12周分别于4、。周8周和12周吸烟完毕后将吸烟组及不吸烟对照组动物一起处死二、免疫组织化学染色每组动物取同一部位气管、肺组织经10%福尔马林固定,常规脱水、透
5、明、石蜡包,。,,埋切成sum厚石蜡切片石蜡切片脱蜡至水经蛋白酶K消化后按常规SABC法进行。,1:;染色Myc抗体为羊抗小鼠单克隆抗体购自北京中山生物技术公司30稀释即用型。,Fas兔抗小鼠单克隆抗体和SABC试剂盒购自武汉博士德试剂公司DAB显色苏木素复,。染阴性对照用PBS代替、三TUNEL染色方法..,,(l)石蜡切片脱蜡至水(2)3%残q甲醇阻断37,C10分钟(3)0IMPH60柠檬,,,酸缓冲溶液微波至95℃置入切片1分钟加蒸馏水迅速冷却S分钟(4)核昔酚核昔酸,,,转移酶混合液37℃1小时(5)转换P0D37℃30分钟(6)DAB显色苏木素复染细
6、胞。,Biraien(核以上原位凋亡检测试剂盒为德国oenr罗Mbn公司产品7)阴性对照为混合,。液中不含末端转移酶用PBS代替、四图像分析及统计学处理,采用CHIAS多功能真彩色图像分析仪每组每张切片在10X20倍的光学显微镜下随机,,计10个视野在一定的光密度条件下以面密度(细胞凋亡的阳性场面积与统计场面积之,,。比)作为标准数据以见士S表示各组数据经SAS软件进行t检验做差异显著性分析结果、一MycFas免疫组织化学染色特征,,Myc阳性染色为细胞核/细胞浆呈棕黄色Fas阳性染色为细胞膜/细胞浆呈棕黄色两。、,。者在各对照组中表达较少小鼠吸烟4周12周时M
7、yc和Fas表达明显上调加倍吸烟剂,。,。,量时上调更加明显吸烟8周时其表达下调接近对照组水平表明在此吸烟过程中、。Myc和Fas表达呈上调下调和再次上调的变化特征、二TUNEL染色特征。TUNEL阳性染色为细胞核呈深棕黄色未吸烟各对照组气道上皮TUENL阳性细胞位,,。,于表层上皮中散在分布阳性细胞数量较少吸烟4周时TUNEL阳性细胞数量明显增,,。,多位于气道表层爆底部呈散在灶状分布吸烟8周时TUNEL阳性细胞数量减少接近,。,,未吸烟对照组水平呈散在小灶状分布吸烟12周时TUNEL阳性细胞数量较4周时多.,。,。且分布紊乱呈片状加倍吸烟剂量时上述改变更为明
8、显、、三MycFas免疫
