水通道蛋白-8对结肠癌细胞凋亡及凋亡抑制蛋白的影响.pdf

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1、3378河北医药2014年11月第36卷第22期HebeiMedicalJournal，2014，Vol36NovNo．22doi：10．3969／j．issn．1002-7386．2014．22．005·论著·水通道蛋白．8对结肠癌细胞凋亡及凋亡抑制蛋白的影响李建强张宏蕊石晓明吕柏楠【摘要】目的通过表达水通道蛋白一8(AQP一8)真核表达栽体，观察水通道蛋白AQP一8对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白(1APs)表达的影响。方法取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验。构建AQP-8真核表达栽体并转染HT-29细胞，通过Westernblot检测GFP．AQP一8转染效

2、率；采用M1Tr法检测各组细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡率；通过RealTime—PCR和Westernblot检测转染GFP．AQP．8的HT一29细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成员c．IAPI、e—IAP2、XIAP、NIAP、Survivin和Livin表达水平。结果Westernblot结果显示，GFP—AQP一8转染后结肠癌HT．29细胞AQP．8基因表达显著上调(P<0．05)。MTr分析结果显示，转染了GFP—AQP一8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率显著增加(P<0．05)；流式细胞分析发现，转染了GFP-AQP一8的HT-29细胞凋亡率显著增加(P<

3、0．05)。RealTime．PCR和Westernblot结果显示，与转染GFP—Nl的阴性对照组相比较，转染了GFP—AQP一8的HT-29细胞c—IAP1、c—IAP1、XIAP、Livin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平下降(P<0．05)，NIAP表达变化不明显(P<0．05)。结论过表达AQP．8可抑制HT-29细胞生长，并能通过下调c-IAP1、c—IAP1、XIAP、Livin和Survivin表达诱导HT一29细胞凋亡。【关键词】水通道蛋白．8；结肠肿瘤；凋亡；凋亡抑制蛋白【中图分类号】R753．3+5【文献标识码】A【文章编号】1002—7386(

4、2014)22—3378—04EfectofAQP一8oncellapoptosisandexpressionofIAPsinhumancoloncancerHT-29cellsinvitroL／Jianqiang，ZHANGHongrui’，SillXiaoming，eta1．DepartmentofSurgery，XinleSocialInsuranceWorkers’Hospital，Hebei，Xinle05o70o．China【Abstract】objecfiveToinvestigatetheeffectsofaquaporin-8(AQP-8)oncellapop

5、tosisandexpressionofinhibitorsofapoptosisproteins(IAPs)bymeansofeukaryoticexpressionvectorthatexpressesAQP一8inhumancoloncancerHT_29cellsinvitro．MethodsHumancoloncancerHT-29cellsatlogarithmgrowthperiodwereusedintheexperiment．AQP·8eukaryoticexpressionvectorwasconstructedandtransfeetedintoHT-29

6、cells．WesternBlotwasusedtodetectthetransfectionefficiency；MTrassaywasusedtodetectthecellgrowthinhibitionrate；flowcytometry(FCM)wasusedtomeasurethecellapoptosisrate．，I’heexpressionlevelsofmRNAandproteinofIAPsincludingc—IAP1，c—IAP2，XIAP，NIAP，SurvivinandLivinweredetectedbyfluorescencequantitati

7、veReal—timeRT．PCRandWesternBlot．ResultsTheresultsbyWesternBlotshowedthattheexpressionlevelsofAQP--8weresignificantlyup-regulatedincoloncancerHT—29cellsafterGFP·-AQP-·8transfection(P<0．05)．MTFanalysisshowedthattheproliferationinhibitionratewasincrea