手足口病的实验室诊断.pdf

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1、山东医药2012年第52卷第35期·经验交流·手足口病的实验室诊断刘艳红，李咏梅(1淄博齐都医院，山东淄博255400；2淄博市临淄区人民医院)手足口病传染性强，传播途径复杂，传播速度水平。病毒感染后中和抗体在机体内存在时间较快，短期内即可造成大流行。我国卫生部于2008年长，故该法是鉴定病毒的可靠方法，一定程度上还可5月起将其列为丙类传染病。实验室检查为手足口反映机体的免疫力。如果中和实验中出现凝集，样病的主要诊断方法，现概述如下。本中有多个病毒会出现抗原漂移，影响抗原分型；接手足口病病毒的特征：手足口病的病原体属于触病毒机会较多者亦容易出现抗体滴度的异常增高小RNA病毒科肠道病毒属

2、，包括柯萨奇病毒A组而混淆诊断。补体结合试验：补体结合抗体出现在(CoxA)的2、4、5、7、9、10、16型，B组(CoxB)的1、感染早期，可鉴别近期感染或既往感染，由于血清与2、3、4、5型，肠道病毒71型(EV71)，埃可病毒不同的EV型存在交叉反应，导致假阳性的结果相(ECHO)等；以EV71和CAV16型最为常见。病毒对较高。③聚合酶链式反应(PCR)。该技术几乎可无包膜，湿、热条件适宜生存及传播，4oC可存活1检出病毒所有的血清型，与传统方法相比敏感性、特a，一20℃可长期保持感染性。病毒对紫外线及干异性和检出率均较高。a转录一聚合酶链反应(RT．燥敏感，各种氧化剂(高锰

3、酸钾、漂白粉等)、甲醛或PCR)：检测时需将RNA逆转录为cDNA，再进行特56℃、30min均能将其灭活；但其对乙醚、75％乙异DNA序列的扩增和检测。该技术克服了病毒分醇、表面活性剂等均不敏感。离培养和血清学方法相对繁杂费时，且在病毒流行手足口病的实验室诊断方法：实验室确诊手足期间无法满足同时处理大量样本的缺点，是肠道病口病的标准为从疑似患者的各种分泌物、体液及组毒感染的快速诊断手段。但其检测周期，操作较复织中分离出肠道病毒和检测到病毒的特异性核酸；杂，结果判定过程复杂，反应产物污染率高。b实时血清标本中检测到人肠道病毒的特异性中和抗体滴荧光PCR：与常规PCR相比特异性强、自动化

4、程度度≥1：256；或急性期与恢复期血清中肠道病毒特异高、污染率低，目前为手足口病的首选检查方法。c性抗体有4倍或4倍以上升高。主要方法：①病毒内标多重荧光RT—PCR：该法结果可靠，能同时检测分离。粪便标本是最常采集的标本，其他包括咽拭EV71和CoxA16且检出率明显高于传统方法。数子或咽喉洗液、脑脊液、疱疹液或血清以及脑、肺、据统计显示，该法存在假阴性现象，提示有传统脾、淋巴结等组织标本。病毒分离培养对流行病学PCR抑制物的存在。④基因芯片技术。该技术是分析具有重要意义，但分离耗时(4—5d)。病毒分将DNA片段高密度的固化到经特殊处理的载体表离培养对技术要求较高，费用较贵，时间

5、长，不适用面，在特定条件下与荧光标记的样品分子进行杂于流行期间同时处理大量样本。②血清学检测。主交，然后通过显微或扫描技术收集杂交信号，并利要包括ELISA、中和抗体试验、补体结合试验(cv)。用生物信息学软件对杂交结果进行分析，从而获得手足口病爆发流行时血清学检测不易区分EV71和样品的遗传信息，主要优点是可以同时检测多段基CoxAl6，只能通过核苷酸序列测定进行区分。因，灵敏度较高；应用多组探针联合判断检测结果可ELISA法：主要用于检测病毒IgM和IgG抗体。特有效降低假阳性率。此外，因基因芯片本身具备高点是快速、经济、对实验室要求不高。检测人双份血通量、大规模的特点，用于鉴别诊

6、断最有优势，可将清标本的中和抗体滴度时通常需用急性期血清与恢多种病原体点样到芯片上进行联合诊断，从而确诊复期血清滴度进行比较，抗体滴度t>4倍增高证明及排除疑似患者。病毒感染。因病毒感染后出现抗体需要一定时间，总之，病毒分离鉴定及血清型分型是检测EV71故ELISA法的早期诊断灵敏度不高。生物素一亲和CoxA16的金标准，但病毒分离鉴定方法繁杂费和素酶联免疫(BA—ELISA)法以抗EV71抗体为包时，血清学检测方法灵敏度不高。PCR法，尤其是被抗体，灵敏度、特异性、准确性及精密性均较高。多重荧光RT—PCR法灵敏度高，特异性好，可靠性中和试验：指将健康人或患者血清与标准肠道病毒强。株

7、或患者自身分离的病毒株中和，测定机体的抗体(收稿日期：2012-068)100