手足口病实验诊断

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1、手足口病的实验诊断安徽省疾病预防控制中心2009.3.11手足口病的病原手足口病（hand-foot-mouthdisease,HFMD）由人肠道病毒感染引起。人肠道病毒为小RNA病毒科（Picornaviridae），肠道病毒属（Enterovirus）的一组单股正链RNA病毒。其中包括埃可病毒（31个血清型）、柯萨奇病毒A组（23个血清型）和B组（5个血清型），还包括3个脊髓灰质炎病毒血清型和人肠道病毒68-71型。CourtesyofLindaM.Stannard,UniversityofCapeTown,S.A.h~30nm二十面体对称无包膜人肠道病毒的毒粒

2、结构人肠道病毒发现的历史脊髓灰质炎病毒：1909年首次鉴定出该病毒，1949年，利用细胞培养的方法增殖病毒，为疫苗的研制奠定了基础。柯萨奇病毒：1948年在美国纽约Coxsackie镇，将两名麻痹患儿的标本接种至乳鼠体内，分离出来的一组病毒定名为柯萨奇病毒。根据它们在乳鼠上产生的组织病理学变化和在细胞培养上的能力，分为柯萨奇病毒A组和B组。埃可病毒：1951年在一名无症状的儿童的粪便标本中分离到，在细胞培养上可以造成致细胞病变，但对乳鼠和灵长类动物不致病。新肠道病毒：随后新发现的病毒被按照序号命名（69~71），最近，已经命名至102型肠道病毒主要血清型手足口病的常

3、见致病病原多种肠道病毒都可引起HFMD，主要为：柯萨奇病毒A组的4～7、9、10、16型B组的1～3、5型埃可病毒的部分血清型肠道病毒71型最常见的为CV-A16和EV71肠道病毒的抵抗力肠道病毒无包膜，乙醚、75%酒精、表面活性剂等均不能将其灭活。对紫外线及干燥敏感；各种氧化剂（高锰酸钾、漂白粉等）、甲醛或56℃30min都能灭活病毒病毒在4℃可存活1年，-20℃可长期保持感染性病毒RNA有感染性。（一）粪便标本采集病人发病7日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集量5～8g/份，采集后立即放入无菌采便管内，4℃暂存立即(12h内)送达实验室，－20℃以下低温冷

4、冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。（二）脑脊液标本出现神经系统症状的病例，要采集脑脊液标本，进行病原和抗体检测。采集时间为出现神经系统症状后3日内，采集量为1.0～2.0ml。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中，4℃暂存立即(12h内)送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。手足口病的标本采集手足口病的标本采集（三）血清标本采集急性期(发病0～5天)和恢复期(发病14～30天)双份配对血清用于抗体检测。检测IgM时，采集(发病7～20天)血。静脉采集3～5ml全血，置于真空无菌采血管中，自凝后，分离血清，将血清置于－20℃以下

5、冰箱中冷冻保存。（四）咽拭子标本采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测。用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3～5ml保存液（细胞维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，4℃暂存立即(12h内)送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。（五）疱疹液可同时采集多个疱疹作为一份标本，用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内装有3～5ml保存液（维持液或生理盐水）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。所采集标本4℃暂存立即(12h内)送达实验

6、室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。手足口病的标本采集标本采集器械要求注射器：医用（5ml和10ml）一次性注射器棉拭子：塑料杆全血收集管：10ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)血清保存管：2ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）粪便保存管：5-20ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）-全国POLIO网络实验室鼻咽拭子保存管：10ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）痰液保存管：50ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）尸检组织冻存管：50ml螺口

7、塑料管(外螺旋、带密封垫圈)；尸检（每一个样品换手术刀）记号笔：油性，防水标本采集器械要求病人标本的采集运输和保藏在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离病毒具有很高的诊断价值。用于采集咽拭子的无菌拭子要放在适当的保存液中，如维持液或生理盐水，以防干燥。标本采集注意事项标本采集注意事项为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发病后尽早采集，尽快检测。不能立即检测的标本应冷冻保存。对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，恢复期血清在发病2-4周后采集。手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本后进行基因检测、抗原检测、血清学抗体检测、病毒分离