微流控芯片免疫分析抗体固定方法比较.pdf

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1、中国医药生物技术2015年2月第10卷第1期ChinMedBiotechnol，February2015，Vo1．10，No．1DOh10．3969／embad．issn．1673-713X．2015．01．016·技术与方法·微流控芯片免疫分析抗体固定方法比较樊斐，张国军，康熙雄，翟燕红化学分析设备微型化领域或微流控分析系统，也称为两通道交叉的方向上就会形成抗原抗体复合物，通入PBS“微全分析系统(pTAS)或芯片实验室(LOC)”，目前己清洗去除未结合的抗体和抗原。每个通道加入20山HRP．AFP受到广泛关注【】。】。20世纪中期，在微流控芯片上建

2、立的一抗体，常温下孵育30min，即形成夹心免疫复合物。清洗种新型分析平台_3】，目前己被广泛应用在生物研究的各个领之后，去除微流通道并在PDMS基底上反应区域加上化学域【3J，例如细胞培养】、单细胞检测[6】、基因分析和免发光底物，然后放入微流控成像仪检测。因为复合物中酶的疫分析[9-10】。近年来，微流控技术得到广泛应用，尤其是在含量与样本中AFP含量正相关，所以根据化学发光的强度免疫分析方面，比如对于蛋白质的检测等。但是，在研究中即可定量测定AFP。我们发现抗体在微流芯片基底表面的固定是影响微芯片免1．2．3不同尺寸微流通道的比较微流通道的尺寸对

3、微芯疫分析的关键因素之一，不仅要求目标蛋白能高效固定，同片免疫分析的影响是不容忽视的，所以首先需要选择用于微时要求固定后的目标蛋白能够较好地保持原有的生物活性，芯片免疫分析最合适的尺寸。我们采用机械加工方法分别制能够高效地捕捉靶蛋白。整个实验中，抗体在微芯片载体表作出高度和宽度皆为100、300、500、800pm的微流通道面的固定是后续实验完成的基础，决定着实验结果的好坏。模具，再经翻模得到相应尺寸的微流通道。将各尺寸微流通因此，本文通过对两种不同的抗体固定方法进行比较研究，道与PDMS基底紧密贴合，其余实验步骤按方法1．2．2进分析利弊，以为相关研

4、究者提供参考。行，AFP浓度依次为400、200、100、50、25、12．5ng／ml，最后分析实验结果选出最适合的微流通道尺寸。1材料与方法1．2．4基于微流通道固定抗体的试验将得出的最佳尺寸1．1材料的微流通道固定在PDMS基底上，从进样孔分别加入20ul甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体、AFP标准品和辣根过浓度为40pg／ml的AFP抗体，室温孵育30min后吸出，氧化物酶(HRP)标记的AFP抗体购白北京科跃中楷生物清洗1次，去除上层微通道，待基底干透后，按方法1．2．2技术有限公司；HRP化学发光底物液为美国Millipore公进行抗原检测，检

5、测AFP浓度为50ng／ml，HRP．AFP抗司产品；聚二甲基硅氧烷(PDMS)基本组分和固化剂为美体以1：200稀释，其他条件不变。国DowComing公司产品；磷酸盐缓冲液(PBS)购于北1．2．5基于点样法固定抗体的试验将AFP抗体用点样京欣经科生物技术有限公司；牛血清蛋白(BSA)购于德国缓冲液稀释到40Ixg／ml，取10¨l加入到384孔板中，Merck公司；DHG．9123A型电热恒温鼓风干燥箱为上海一用晶芯SmartArrayer-48点样仪在PDMS基底表面按照预恒科学仪器有限公司产品；微流控成像仪为国家科学纳米中先设定好的模式进行点

6、样。模式1：用d=120的点样心产品；晶芯SmartArrayer-48点样仪为生物芯片北京国家针进行连续点样，同一阵列内各点间距为120pm，各阵列工程研究中心产品。左右间距为4mm，上下间距为2ITu'n；模式2：用d=300pm1．2方法的点样针进行单点点样，点间距为2mm。室温固定30min1．2．1微流控芯片的制各本研究中所用的微流芯片为后，将基底与微通道黏结后，按方法1．2．2进行抗原检测，7个通道。先通过机械加工法制作微流通道的模具，然后用AFP浓度依次为400、200、100、50、25、12．5ng／ml，分模塑法翻模制备微流通道，具

7、体步骤如下：先将PDMS基别加入到每一通道内进行反应，HRP—AFP抗体以1：200稀本组分和固化剂以10：1的比例混合，真空抽气使浮在表面释，其他条件不变。上的气泡破裂。将抽气后的混合物浇铸在模具上放到80℃烘箱中25min，冷却后移去固化的PDMS层，再用带针的2结果注射器在PDMS层上打孔以得到通道的进样孔，使用不同2．1微流通道尺寸筛选尺寸的模具，即可获得相应尺寸的微流通道。结果表明，宽度为100pm微流通道检测结果未见明1．2．2微流控芯片检测AFP根据夹心免疫分析的原理，首先在微通道内加入AFP抗体并固定，然后揭去通道并在作者单位：1000

8、26北京，首都医科大学附属北京妇产医院检验科(樊斐、与所固定的抗体条带垂直的方向上铺另一个通道