微流控芯片电泳免疫法检测β2微球蛋白.doc

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1、微流控芯片电泳免疫法检测β2微球蛋白作者：潘爱平，王惠民，金庆辉，赵建龙【摘要】目的：建立一种基于微流控芯片电泳技术的快速微量蛋白检测方法。方法：用过量FITC-β2-MG抗体,与分析体系中β2-MG发生非竞争性免疫反应，FITC-β2-MG抗体和免疫反应形成的荧光免疫复合物通过微流控芯片电泳实现分离，激光诱导荧光检测荧光信号。结果：分别考察了电泳缓冲体系、pH值等对芯片电泳行为的影响，结果表明pH8.33、45mmol/LTBE缓冲液分离效果较好，在此基础上实现了β2-MG标准品的分析，建立了微流控芯片电泳免疫分析方法。结论：微流控芯片电泳免疫分析方法可在2min内完成一

2、次样品的电泳分析,且试剂和样品消耗少，灵敏度高，改善了常规免疫分析的不足，显示出较好的应用前景。【关键词】微流控芯片；毛细管电泳；激光诱导荧光；β2微球蛋白Microfluidicelectrophoresisimmunoassayforβ2-microglobulindetection[Abstract]Objective:Toestablishamethodtodetectmicro-volumeproteinbasedonmicrofluidicchipelectrophoresisandimmunoassay.Methods:Anon-competitiveimmu

3、noassaywasperformedbasedonmicrofluidicchipelectrophoresis.UsingFITClabeledβ2-microglobulinantibodytocaptureβ2-microglobulininsample,excessiveFITClabeledβ2-microglobulinandimmune-complexwereseparatedanddetectedbymicrochipcapillaryelectrophoresiswithlaserinducedfluorescence.Results:Afterstud

4、yingtheseparationanddetectioninfluencefactorsincludingelectrophoresisbufferconditions,pHvalue,wegottheexcellentelectrophoresisconditionwaspH8.33,45mmol/LTBEbuffer,600V/cmseparationelectricfielde,Basedonthiselectrophoresiscondition,thestandardβ2-microglobulindetectionwassuccessfullyperforme

5、d.Conclusion:Microfluidicchipbasedelectrophoresisimmuneassayformicro-volumeproteindetectionwasintroduced.Thedetectionandanalysisprocesswasperformedwithin2minuteswithlesssampleconsumingandhighsensitivity.Itsimultaneouslyovercametheshortageofroutineimmunoassay.[Keywords]Microchip;Capillaryel

6、ectrophoresis;Laserinducedfluorescence;β2-microglobulin5尿微量蛋白是尿中某些蛋白的排泄呈亚临床升高，而常规方法难以检测的一种病理现象，当尿中出现微量蛋白，可反映肾脏结构与功能的轻度或早期受损[1]，对β2微球蛋白（β2-MG）的检测可用于早期肾小管损伤的监测（如糖尿病肾病、高血压肾病）。毛细管电泳免疫分析(capillaryelectrophoresisbasedimmunoassay，CEIA)较传统蛋白检测方法简便、快速，但仪器昂贵，从而限制了在临床的应用推广。微流控芯片具有微型化、集成化、分析速度快、试剂消耗少等

7、显著优点，已经在免疫测定[2]、DNA分析和测序[3]、氨基酸和蛋白的分离[4~6]以及生物细胞研究[7,8]等方面发挥出优势。本研究将CEIA和微流控芯片相结合，采用高灵敏度激光诱导荧光检测，用于β2-MG标准品的分析，在优化了缓冲体系成分和pH值等参数的基础上，实现了β2-MG的快速分离和分析，有关临床研究将另文报道。该法比传统免疫及单毛细管方式检测蛋白有更多优势：分析速度快，效率高，样品用量少，检测限低，是今后用于尿液中微量蛋白检测分析最具潜力的方法之一。1材料与方法1.1材料1.1.1微流控芯片在50mm×