膜型基质金属蛋白酶-1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成的影响.pdf

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1、中国医药导报2014年12月第11卷第36期·论著·膜型基质金属蛋白酶一1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成的影响程锐蔡欣然周浩辉柯坤陈燕凌福建医科大学附属协和医院肝胆外科．福建福州350001【摘要】目的研究膜型基质金属蛋白酶一1(MT1一MMP)表达对肝细胞癌血管生成拟态(VM)形成的影响及机制。方法构建靶向MT1一MMP的RNA干扰质粒载体，转染肝癌细胞系Be17402，实时定量PCR及Westernblot检测干扰效果；在体外三维细胞培养体系中观察其对VM管状结构形成的影响；Transe11侵袭小室实验检测细胞侵袭能力。结果靶向抑制MT1一MMP的表达下调肿瘤细胞侵袭能力．影响肝癌细胞

2、在三维细胞培养体系中VM管状结构的形成。结论MT1一MMP表达影响肝细胞癌VM的形成，可能成为肝细胞癌抗血管生成治疗的新靶点。【关键词】肝细胞癌；基质金属蛋白酶；血管生成拟态；RNA干扰【中图分类号】R735．7【文献标识码】A【文章编号】1673—7210(2014)12(c)一0013—04Eefectsofexpressionofmembrane-type1matrixmetalloproteinaseonvasculogenicmimicryformationinhepat0ceUularcarcinomaCHENGRuiCAIXinranZHOUHaohuiKEKunCHENYa

3、nlingDepartmentofHepatobiliarySurgery，UnionHospitalAfiliatedtoFujianMedicalCollege，FujianProvince，Fuzhou3500O1．China【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheeffectofMT1-MMPonvasculogenicmimicry(VM)formationinhepatoeellularcarcinoma(HCC)anddiscussitspossiblemechanisms．MethodsRNAinterfereplasmidtargetingM

4、T1一MMPwascon—strnctedandtransfeetedintoaHCCcelllines．InterferenceeffectwasdetectedbyrealtimePCRandWesternblot．VMnetworksin3Dcellculturesystemwereobservedwithamicroscope．Cellinvasionassaywasperformedusing24-welltranswel1．ResultsInhibitionofMT1一MMPexpressionimpairedVMnetworkformationinvitrobydown—re

5、gulatingcellinvasion．ConclusionMT1-MMPinfluencesvasculogenicmimicryformationinHCCcelllineandoffersapotentialmoleculartargetforHCCantiangiogenesistherapy．【Keywords】Hepatocellularcarcinoma；Matrixmetalloproteinase；Vasculogenicmimicry；RNAi1999年Maniotis等f1]在对眼葡萄膜色素瘤及转移制及治疗靶点的研究仍处于起步阶段。本研究拟探讨膜性皮肤黑色素瘤的研究

6、中发现一种无内皮细胞参与．型基金属蛋白酶(MT1一MMP)表达对肝细胞癌VM生成由肿瘤细胞排列形成的管道结构，血管造影证实其参的影响，为肝细胞癌抗血管生成治疗提供新的思路。与肿瘤的血液供应。他们将这种血管样结构命名为血1材料与方法管生成拟态(vculogenicmimicry，VM)。VM合理的解1．1细胞株及主要试剂释了目前针对内皮细胞的抗血管生成药物实际疗效Bel7402肝癌细胞系购于中国科学院典型培养物与预期存在较大差距的原因．对经典的抗肿瘤血管生保藏委员会细胞库：兔抗人MT1一MMP抗体购于英国成治疗理论提出了挑战圆。后续的研究证实VM存在于Abeam公司；胎牛血清、DMEM培养基

7、、PCR引物、多种高侵袭性的肿瘤，且存在VM的患者预后不佳。TrizolRNA提取试剂、逆转录试剂盒、Lipofeetamine原发性肝细胞癌是一种恶性程度、侵袭性高的实体肿2000TM脂质体、质粒抽提试剂盒购于美国Invitrogen公瘤，手术切除后复发率高，预后较差f6。肝细胞癌中司；易必迪血管生成板(IBIDITM一slide)购于德国VM的存在已被证实01。但目前肝细胞癌VM形成机Ibidi公司；基质胶购于美国C