临床检验技术床旁分析技术

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1、第十七章　床旁分析技术1POCT的概念:“POCT”的组成包括：point（地点、时间)care（保健、照料）testing（检验、试验）point-of-caretesting即:即时检测或床边检测,主要是指可以远离中心实验室，在患者身边快速进行并能快速获取准确结果的实验室检查2POCT的应用早期：尿液分析、血糖分析目前：血气分析、电解质分析、血液分析、药物应用监测、抗凝测定、心肌损伤标志物检测、甲状腺激素检测3POCT采用的主要技术:电化学分析酶学分析免疫分析荧光分析层析技术酶联免疫分析双层膜法（干化学法测定）多层膜法（干

2、化学法测定）免疫金标记技术免疫荧光技术生物传感器技术生物芯片技术红外和远红外分光光度技术4实验仪器小型化操作方法简单化结果报告即时化POCT仪器的主要特点:5第一节免疫胶体金分析技术6一、基本原理以胶体金标记结合抗原抗体反应的一种新型的免疫标记分析技术。斑点免疫金渗滤分析法（DIGFA）免疫层析法（ICA）检测原理:胶体金标记物胶体金7斑点免疫金渗滤分析法（DIGFA）以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可过滤性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体滤过膜的方式迅速完成免疫渗滤装置及操作示意图8以金胶粒或着色

3、乳胶粒等有色粒子作标记物，层析条通过多种材料复合而成，多用于定性的检测，也可半定量分析。免疫层析法（ICA）免疫层析法检测试剂条结构9BCTRA免疫层析试验原理示意图吸水材料免疫金复合物测试区参照区末段吸水材料层析方向10检测特点：试剂和样本用量极小不需贵重仪器没有污染性物质检测速度快技术关键步骤：胶体金制备蛋白质(第二抗体)的胶体金标记11二、胶体金的制备还原法还原剂：柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、硼氢化钠等制备方法及注意事项：方法：在加热搅拌器上将0.01％氯金酸水溶液加热沸腾后，滴加一定量的1％柠檬酸三钠溶液，煮沸约15mi

4、n后冷却即可。柠檬酸三钠用量从低到高可获得相应胶体金的颜色从蓝、紫到红、橙。注意事项：注意所用玻璃容器的清洁及硅化12三、抗体蛋白的胶体金标记标记方式:静电吸附在弱碱环境下胶体金颗粒带负电荷，可与蛋白质分子中碱性氨基酸带正电荷的基团形成静电结合，属于非共价结合。影响蛋白质与胶体金的结合的因素蛋白质所带电荷溶液的pH蛋白质的相对分子质量胶体金颗粒的大小蛋白质与胶体金的比例溶液的离子强度13胶体金标记的关键步骤：(一)待标记抗体蛋白溶液的准备去无机离子和蛋白聚合物(二)待标记胶体金溶液的准备合适的pH和离子强度(三)标记抗体蛋白最

5、适用量的确定以最低稳定用量的120％为标记抗体蛋白的最适用量(四)胶体金与抗体蛋白的结合电磁搅拌、加入稳定剂(五)胶体金标记抗体蛋白的纯化离心法和凝胶过滤法14四、免疫胶体金分析技术任床边检测中的应用15第二节　干化学分析技术16定义：干化学分析(drychemicalassav)指建立在某些特殊固相支持物上的检测分析技术，通常将测定某些项目所必需的全部或部分试剂固定在具有一定结构的载体上，通过滴加液态样品溶解载体上的试剂，并与样品中的待测成分发生反应，在支持物的局部区域产生信号变化，再通过检测以获取待测物的浓度。17检测原理

6、：反射光度法差示电位法特点：速度快、检测灵敏度和准确度较高可采用仪器进行检测18一、基本原理(一)双层膜法：特点：通过反射光度计测定其颜色改变，从而计算待测物质的含量双层膜法不能排除样品中某些物质对吸光度的干扰主要应用于尿生化分析试剂19(二)多层膜法采用反射光度法差示电位法检测原理：特点：集光学、现代化学、化学计量学、酶学工程和计算机技术于一体定量的准确度和精密度已经达到了常规湿化学的水平，部分甚至达到了参考方法的水平201．基于反射光度法的多层膜21分布层光漫射层辅助试剂层试剂层又称渗透扩散层，由高密度多孔聚合物组成，其特

7、点是能够快速吸附液体样品并使之迅速、均匀地渗透，并可阻止一些颗粒成分(如血细胞、结晶)和大分子(如蛋白质)向下渗透，因此能透过分布层的基本上是无蛋白滤液为白色不透明层，由反射系数>95％的物质如BaSO4，或TiO2构成。光漫射层的特点是可以隔离分布层中有色物质的干扰，使反射光不受影响；同时因其具有高反射系数，可为下面的试剂层提供反射背景，使入射在光漫射层上的光最大限度地反射回去，以减小因光吸收所引起的测量误差主要作用是去除血清中的内源性干扰物，从而使检测结果更加准确，还可运用亲和过滤、凝胶过滤、免疫沉淀等方法，有选择地把待测

8、物和干扰物分离。是多层膜法中保证测定结果更准确、误差更小的一个非常重要的结构又称为指示剂层或反应层，由亲水性多聚物构成，该层固定了项目检测时所需的部分或全部试剂。用于检测不同项目的干片，其固定的试剂成分不同起支持作用，为光学透明的塑料基片，允许入射光和反射光完全透过222．基