血虚证两种模方法的比较及中药疗效评价.doc

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1、血虚证两种造模方法的比较及中药疗效评价卢文丽方肇勤2007-01-17一、实验目的1.比较血虚证两种不同造模方法的优劣。2.评价中药复方的疗效。二、实验材料1．实验动物：昆明种小鼠，雄性，40只。2．药物或试剂乙酰苯肼（APH，为白色粉末状固体，用时配制成2％溶液）、环磷酰胺粉针剂：200mg×10支×1盒（用时配成10mg/ml溶液）、无水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化钠溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。3．仪器或设备电子天平1台，100ml柱形小烧杯2个，50ml/100ml量筒各1个，10ml刻度吸管2个，洗耳球1个，玻璃棒2根，60ml小口试剂瓶2个

2、，标签纸1张，酒精棉球，1ml一次性注射器数支，小鼠灌胃针2支。以上为动物造模及药物配制用材料，余具体见各实验指导。三、实验步骤1．动物分组随机分为正常组A、环磷酰胺模型组B、乙酰苯肼模型组C、乙酰苯肼治疗组D等4组，每组10只。分笼饲养于内铺垫料的塑料笼内，每笼等量。2．2％乙酰苯肼溶液的配制（1）电子天平取乙酰苯肼粉末1g，并将其小心倒入100ml小烧杯内；（2）玻璃滴定管吸取10ml无水乙醇，注入烧杯内，玻璃棒搅拌；（3）待粉末几乎溶解完全后，50ml量筒量取30ml生理盐水倒入烧杯内，搅拌。若仍有粉末未溶解，置于37℃水浴箱内一段时间即可。（4）将完全溶解后的

3、溶液倒入50ml量筒内，添加生理盐水定容至50ml。将溶液倒入50ml小口试剂瓶内，贴好标签，常温下保存。3．药物及剂量采用四物汤治疗：当归10g，川芎10g，白芍10g，熟地黄10g。给药剂量按照成人体重（60kg）的10倍计算。药物煎煮浓度为0.4g/ml，约灌胃0.5ml/只。4.造模及给药方法组别造模灌胃给药A腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水，第1、2日各1次。皮下注射同B组造模药物等量的生理盐水，第1、4日各1次。第1-7日予同D组等量自来水B腹腔注射10mg/ml环磷酰胺注射液，1mg/10g，第1、2日各1次。皮下注射同B组造模药物等量生理盐水，第1

4、、4日各1次。同上C皮下注射2％乙酰苯肼溶液，1.7mg/10g，第1、4日各1次。腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水，第1、2日各1次。同上D皮下注射2％乙酰苯肼溶液，1.7mg/10g，第1、4日各1次。第1-7日灌胃腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水，第1、2日各1次。四物汤水煎液5．自造模之日起，各组动物添加等量水及饲料，建议350ml/10只/笼，200g/10只/笼。四、指标检测1．四诊观测见小鼠全套四诊观测方法，于实验第1、4、8日进行。2．实验室指标检测（1）第8日处死动物，检测包括病理组织学、生物化学、骨髓及血涂片、分子生物学指标等。（2）各组小

5、鼠在实验前一天，即第7日开始禁食不禁水。（3）各项实验室指标检测详见各实验指导。以上具体指标及方法参见各实验指导。五、注意事项1．实验动物观察室应为开放式，温度、照明、噪音、换气等条件控制在规定的范围内。垫料为木刨花，每周更换两次。每天定时清洁动物房。2．注意动物笼具、饮水瓶是否完好，发现损坏及时更换，及时添加饮水及饲料，并予以记载。3．环磷酰胺溶液配置较为简单，但乙酰苯肼溶液配制时需要注意，尽可能按照实验步骤进行，并注意保存条件。4．四诊观察时应仔细并注意比较，并予以详细记载。5．灌胃治疗时间最好在每天同一时间。6．如在实验过程中出现动物死亡的情况，应记载死亡日期、

6、组别、编号及死亡原因。六、思考题1．结合相关参考文献和本实验比较乙酰苯肼和环磷酰胺模型。2．中药复方疗效及原因分析。