浅析血凝抑制试验影响因素.pdf

《浅析血凝抑制试验影响因素.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、基础研究中国畜牧兽医文摘2011年27卷第6期浅析血凝抑制试验影响因素王剑子L佳佳’王军芳(1．河北省武安市农牧局，武安056300；2．河北省武安市综合职业技术教育中心，武安056300)某些病毒(如新城疫、禽流感病毒等)具有凝集某种动第4孑L，弃去25l。用微量移液器再吸取l％红细胞悬液依次物红细胞的现象，这种现象可被特异性免疫血清所抑制，即加人1—5孔，每孔25l。于微量振荡器上振荡1分钟。室温静为红细胞的血凝抑制。血凝抑制试验可用于测定免疫抗体效置2O30rnin后观察结果。若第1、第2、第3孔为完全凝集，价、辅助诊断病毒性疾病等。在基层工作中微量血凝抑制试第4：fL红细胞

2、为50％沉淀，第5孔为对照完全沉淀，如果出现以验(HI)最常用于新城疫、禽流感等免疫抗体的检测。尽管上结果，表明所配4单位抗原准确，校正成立。否则，需重新此法操作简便、快速、准确、实用，但在实践中也常常由于测定抗原效价，重新配制4单位抗原，并作4单位抗原校正，某些因素的影响，从而使试验结果不精确，有时甚至无法判直至结果准确。定结果。在此，分析总结实际中经常遇到的影响血凝抑制试6适量配制4单位抗原和1％红细胞验的因素，愿与同行进行探讨。配制好的4单位抗原在2～8℃保存条件下，3d内效价基1移液器的使用本无变化，1％红细胞在28。c保存条件下，3d内不会发生溶把每个吸头安装牢固，操作时

3、手压下的力度均匀，否则血。超过3d，4单位抗原和1％红细胞会因自身效价降低和溶移液量偏差，造成结果不准确。移液器在96：~LV型板的试验使血而影响实验结果。因此，每次实验前要根据待测样品数量用中，不要紧靠v4L底部，可能会影响液体正常吸人，造成试计算一下本次实验需要多少的4单位抗原和1％红细胞，适当配验液量偏少。置，避免闲多配而引起浪费。2被检血清腐败变性7实验时的温度被检血清腐败变性严重影响免疫抗体检测。因此，血样实验室温度，从4—37oC，随着温度上升，HA与Hl滴度采集后要及时分离血清，分离后及时测定或放置在4℃冰箱内提高，但在37时，凝集的红细胞易洗脱；4oC以下红细胞易保

4、存，要力求新鲜，如暂时不测定可冷冻保存。血清使用前产生自凝，故操作常用18～22℃。要充分摇匀。8抗原抗体反应时间3红细胞来源影响试验结果抗原抗体反应时间也直接影响实验结果，尤其是夏天，由于不同个体鸡只红细胞对病毒的敏感性不同，从而影反应时间过长，4倍抗原直接失效，导致实验结果失败，即使I~HI效价，所以一般需要采取3只以上公鸡红细胞混合一起在有空凋的房间抗原抗体反应lO～15min即可，时间长抗原易用，最好用非免疫公鸡，如果用免疫公鸡代替，须增加洗涤失效，影响实验结果，冬天可按照实验标准反应30min。次数和时间。红细胞浓度以1％为宜。9微量血凝板的清洗，对试验结果有很大的影响4

5、病毒悬液和红细胞悬液使用目前，实验单位和基层多使用一次性96：~Lv型板，使用病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时浓度高低后不用清洗。若使用玻璃材料的96：~L凝集板，使用后要按程不一，会人为造成误差。因此抗原和红细胞使用前一定要摇序清洗干净：试验完毕即将凝集板用自来水反复冲洗，再用匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。含洗涤剂的温水溶液浸泡30rain，并在洗涤剂溶液中以棉拭子5单位抗原配制刷洗凹孔及板面，待反应板干燥后，放到2％～3％浓度的盐酸4单位抗原要现用现配，混悬液要混匀，配好的抗原室温中浸泡24h以上，捞出用自来水冲洗多次，最后以蒸馏水冲洗下放置不得超过4h，不可反复冻

6、融。为防止4单位抗原配制不2—3次，在37温箱中烘干备用。准确。在作HI试验前必须做4单位抗原校正。用微量移液器向总之，在进行微量血凝抑制试验中，一定要细致耐心，反应板的第2—5~L／m生理盐水25l，第fL不加。用微量移液操作程序要规范，同时综合考虑各方面的冈素，发现问题及器吸取4单位抗原25Ia,1分别加入第l孔、第2孑L中，从第2孔开时纠处理，这样才会获得满意的实验结果以正确评价疫苗始挤N4～6次混合，然后吸出251至第3孑L，依次倍比稀释到免疫的效果及辅助诊断病毒性疾病。项目优化能繁母猪的生产能力。果到位，在确保疫苗质量的同时，也要保证疫苗供应。要建造标准化猪舍、标准化饲养

7、、标准化防疫，才能减少疫病的4．4提高疫病防控能力近几年，生猪疫情的发生越来越频繁，养殖风险也越来发生，降低饲养成本，增强抵抗市场风险综合能力，保证整越大，疫病频发成为困扰养猪发展的一大难题，吞噬着养殖个养殖区域的防控安全。利润。加大生猪卫生防疫也越来越重要，因而对生猪免疫疫4．5拓展渠道，大力发展生猪深加工企业苗质量要求也越来越高。积极研发高质量疫苗，做到疫情防涿鹿县生猪深加工企业是空白，大力发展深加工企业，治“三到位”，即：防治疫苗到位、防治人员到位、防治效在一定