家畜传染病常用血清学诊断的方法.pdf

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1、曰检疫检验家畜传染病常用血清学诊断的方法李亚军(河北省卢龙县动物疫病预防控制中心河北卢龙066400)血清学诊断是建立在抗原与相应抗体发生可见微量凝集试验，方法与试管凝集试验基本相同，反应这个原理的基础上，有的反应是不可见状态，可只是在微量反应板上进行，抗原、抗体用量很少，故应用补体、溶血以及荧光素、酶和同位素标记等指示称微量凝集试验。选用u型或V型微量反应板，用稀系统，使其成为可见或可测状态。释棒将待检血清在反应板上作系列稀释，随后滴人1直接凝集试验抗原，振荡混合后，置3722温箱4小时或室温静置细菌、红血球等

2、颗粒性抗原与相应的抗体在电4～8小时，判定结果，其判定方法与试管凝集法相同。解质参与下，发生反应，相互凝集形成团块，这种现2间接凝集试验象称凝集反应。参与反应的抗体叫凝集素，抗原称为将可溶性抗原(或抗体)吸附于与免疫无关的凝集原。按试验方法分试管法、玻片法、玻板法及微小颗粒(载体)的表面，此吸附抗原(或抗体)的载量凝集法等。体颗粒与相应的抗体(或抗原)结合，在有电解质存玻片凝集反应又称快速凝集反应，为定性试验。在的适宜条件下发生凝集现象，称此为间接凝集试在流行病学调查中较为常用，现以此例说明其操作验，也称为被动凝

3、集试验。方法。先用滴管吸取诊断液l滴(约0．05毫升)滴在乳胶凝集试验是利用聚苯乙烯乳胶的微球作为洁净的玻板或普通厚玻璃上。刺破猪耳或翅静脉采载体，吸附抗原(或抗体)，用以检测相应的抗体(或血1滴(约0．04毫升)，将二液混匀，可用牙签搅拌抗原)，称为乳胶凝集试验。因乳胶为乳白色，玻片法均匀，或微微摇动玻板，时时变动玻板水平位置，使最好选用黑色玻片。取待检血清(或抗原)和致敏乳抗原与血液充分混合。在1～3分钟内细菌和红细胞胶各1滴，混匀，阳性者在5分钟内即出现凝集反从混合液滴的边缘开始逐渐凝集成较大的颗粒，或应，

4、但在20分钟时需要再观察1次，以免遗漏弱阳呈片状、团块状，将红细胞凝集成许多小区，余下透性。试管法是将待检血清(或抗原)做系列倍比稀明的液体，外观呈花斑状，则为阳性反应。如果在2～3释，后用l000克的离心力，低速离心3分钟观察结分钟之内不出现凝集现象，则为阴性反应，此时可见果，根据上述的澄清程度和沉淀颗粒多少，判定凝集玻板上的混合液保持原来的状态，或是中间部分较程度。浓，四周为较稀薄的混悬物。反应需在没有风沙处，间接血凝试验是以红细胞为载体，将抗体(或抗气温在20～30"12。此外，还可用血清快速凝集反应，其原

5、)吸附红细胞表面，用来检测微量的抗原(或抗操作方法是在1块置于加温设施上衬有黑色底板的体)，吸附有抗体(或抗原)的红细胞称致敏红细胞。载玻片上，滴1滴血清或相当凝集价的稀释血清，并间接血凝试验可选用u型或V型血凝板，将待与细菌混悬液均匀混合，如为阳性反应，则细菌于几检血清在血凝板上用稀释或定量移液管作倍比稀分钟之内凝集成块；如为阴性反应，则液体保持一致释，加等量致敏红细胞悬液，振荡混匀后，置室温2混浊的红色。小时观察结果。以出现50％凝集的血清最大稀释度试管凝集试验为定量试验，操作时，将待检血清为该血清的血凝价。

6、用生理盐水做倍比稀释，加人等量已知抗原，置于3血凝与血凝抑制试验372水浴锅内数小时观察，并以一(不凝集)、+有许多病毒能够凝集某些动物和人的红细胞，(25％凝集)、+++(75％凝集)、++++(100％凝而这种血凝作用可被特异性抗体所抑制。因此，可应集)表示凝集情况。用标准病毒悬液测定血清中的相应抗体或应用特异玻板凝集试验，在洁净的玻片上，按试验要求划性抗体鉴定新分离的病毒。血凝与血凝抑制试验是成数个小方格，用生理盐水倍比稀释血清，加入抗诊断的重要手段。原，用才签自血清稀释县混微量血凝试验，采用96孔V型微量

7、板。待测抗合，混合后用酒精灯稍微-8原自1～1O倍比稀释，每孔加人抗原0．05毫升，最后分钟后判定结果，判定方；一孔不加抗原作对照。再吸取0．5％红细胞悬液依次养殖技术顾问2013．8检疫检验加人各孔，每孔0．05毫升，置微型混合器上振荡1分在碱性环境中，抗原带负电荷，电泳时向正极移动，钟或用手轻轻振荡血凝板，使血球和抗原充分混合。抗体带电荷弱，在电泳时由于电位差作用，向负极泳然后置室温(18～2O℃)下3O一4O分钟，根据血球沉动。将抗体置于正极，抗原置于负极，电泳时，抗原抗降图型判定结果，以出现完全凝集的抗原

8、最大稀释体相向移动，并相遇形成沉淀线。由于抗原抗体的定度为该抗原血凝滴度。出现血凝的微量板孔红血球向移动，不仅缩短了反应出现的时间，而且由于抗原会均匀分布于底周围，完全不出现血凝的则红血球和抗体的局部浓度增高，从而提高了反应敏感性。试全都集中于微量孔的最低点，不完全凝集的形态介验时，在琼脂凝胶板上打孔，孔径3毫米，孑L距5毫于两者之间，此法主要用于检测抗原的效价。米，1张