液相色谱法2-分配、离子交换、凝胶.ppt

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1、第二节分配色谱一、基本原理1、吸附色谱的局限性（1）吸附色谱不适合于分离强极性的亲水性物质（成分）；（2）吸附剂的含水量对吸附剂的吸附能力影响较大，常使结果重现性较差；（3）易出现拖尾峰。2、分配色谱原理（1）固定相为液体将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上，形成一层液膜，称为固定相。吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。根据组分在两相中的溶解度不同而分离。（2）“相似相溶”原则极性物质在极性溶剂中溶解度大，K大；非极性物质在非极性溶剂中溶解度大，K大。（3）分配定律与分配等温线（4）分配色谱的特点：a、重现性

2、b、峰对称c、无强烈滞留现象.几乎适用于各种类型的化合物，特别适宜于亲水性物质，如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。二、载体只起负载固定相的作用。要求：惰性、无吸附能力、纯净、颗粒均匀。种类1）硅胶：重现性差2）硅藻土：应用最多3）纤维素：纸色谱三、固定相和流动相的选择正相分配色谱：固定相的极性大于流动相的极性；固定相：水、缓冲溶液、稀硫酸、甲醇、丙二醇等；按一定的比例与载体混匀后填装于色谱柱。流动相：石油醚等洗脱顺序:极性大的组分保留作用强；极性小的组分保留作用弱反相分配色谱：固定相的极性

3、小于流动相的极性。固定液：硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。流动相：水、各种水溶液（酸、碱、盐及缓冲液）、与水混合的有机溶剂。洗脱顺序:极性小的组分保留作用强；极性大的组分保留作用弱四、分配色谱操作注意事项1、两相溶剂的处理2、上样量与样品前处理。3、柱色谱4、纸色谱第三节离子交换色谱法(ionexchangechromatography)一、基本原理1、离子交换剂与离子交换过程（1）离子交换剂为一种固体状可在水溶液中浸润和溶胀的多孔颗粒，其表面有许多可电离的基团，在水中电离时，有一种离子可在水中自由移动，而另

4、一种则在固定相上不能自由移动。可自由移动的离子可以被其它同类离子置换，即离子交换。（2）离子交换过程水溶液中（流动相中）的各种离子，可与离子交换树脂上固定的离子基团结合，使原来与其结合的离子被置换，进入流动相而发生置换。带负电的交换基团（固定的离子基团，如磺酸基、羧酸基）：用于阳离子分离；带正电的交换基团（固定的离子基团，如季胺盐）：用于阴离子分离。2、分离机理（1）不同的离子与交换树脂的结合力不同，从而固定相对它的保留能力不同，从而造成差速迁移。（2）离子交换平衡：K大，Na+易与固定相结合，移动慢；反之，移动

5、快。tR=tm(1+K’)VR=Vm(1+K’)=Vm+KVSK’为分配系数平衡时K为选择性系数（交换平衡常数）二、离子交换树脂1、离子交换树脂的构成由苯乙稀和二乙烯基苯聚合而成的网状结构，不溶于水和有机溶剂，性质稳定。苯乙烯组成长链；二乙烯基苯为交联剂2、离子交换树脂的类型（1）阳离子交换树脂—可交换的离子为阳离子。氢型、钠型强酸型、弱酸型、中强酸型（－COOH、－PO3H、－SH）例如：磺酸型R-SO3－H+(pH范围宽)**应注意pH范围，否则交换容量急剧下降。（2）阴离子交换树脂—可交换的离子为阴离子。按

6、不同碱性分：强碱型（季胺基团）—NR3+(pH<11)－NH2,－NHR,－NR2等(pH<8)按可交换的离子分：氢氧型、氯型3、离子交换树脂的特性①交联度：表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量，通常使用4～12%的树脂。交联度大：树脂孔小，刚性强，孔穴多，离子基团多，溶胀小。适合于体积较小的无机离子的分离交联度小：树脂孔大，刚性差，渗透性好。适合于体积较大的有机离子的分离②溶胀：树脂内极性基团吸水性极强，大量的水进入树脂内部，产生膨胀，叫溶胀。溶胀程度与树脂类型、交联度有关。因此，严禁干法装柱。④粒度：离子

7、交换树脂颗粒的大小（指溶胀状态）③交换容量：每克干树脂中真正参加交换反应的基团数。常用单位：mmol/g,mmol/ml等影响因素：pH、交联度、溶胀特性、分离对象，只能以实际测量为准。三、经验规则（亲和力大小规则）对小离子亲合力大水合离子半径越小，亲合力越大对电荷多的离子亲合力大A4+>B3+>C2+>D+大分子量的有机离子,有较高的亲和力四、流动相1、组成：一般为盐类的缓冲水溶液（有一定的pH值）。2、对分离的影响2、对分离的影响①流动相主要影响组分离子和交换基团形成离子对的过程②pH对弱酸、弱碱的影响影响其

8、离解平衡，即控制了组分形成离子的程度：[离子]组分↑，则K’↑；[离子]组分↓，则K’↓不同离子交换剂的pH适用范围：强酸型：较宽;强碱型：PH<11;弱酸型:PH>6;弱碱型：PH<8③离子强度的影响(盐类浓度)离子强度↑，溶剂强度↑，洗脱能力↑。④平衡离子(即流动相中的盐类)的影响它的种类可影响分离的选择性，浓度影响溶剂强度；它们与树脂的亲合力不同，从而影响组分的相对