2-凝胶层析课件.ppt

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1、电脑已调好务请同学暂时不要使用谢谢合作凝胶层析一原理当含有大、小不同分子量的样品溶液加入到凝胶层析柱内后，样品溶液流经层析柱，加之向层析柱内连续不断加入洗脱溶液，小分子通过扩散作用进入凝胶颗粒的微孔中，而大分子则被排阻在颗粒之外，因此，大、小分子向下移动的速度发生差异，必然导致大、小分子分开的距离随之增大。大分子物质行程较短，先流出层析柱，小分子物质善在行经中，从而将大、小分子分离开来，达到了分离的目的。凝胶层析的简单原理图凝胶层析的简单原理图二实验目的与要求用凝胶柱，分离一含有溶质分子大小不同的样品溶液。并

2、绘出洗脱曲线。通过实验了解并熟悉凝胶渗透层析的原理和实际应用三主要仪器与器主材1、主要仪器（1）、电脑（2）、色谱工作站（3）、紫外检测仪（4）、恒流泵2、主要器材（1）、层析柱（2）、自动取液器（3）、量筒（4）、试剂瓶（5）、烧杯（6）、滴管（7）、玻棒、等等四试剂与配制4-1、试剂(1)、葡聚糖凝胶（SephadesG-25）(2)、磷酸氢二钠(3)、磷酸二氢钠(4)、血红蛋白(5)、核黄素4-2、试剂配制(1)、洗脱液（0.05mol/L,pH7.3磷酸缓冲）的配制：分别称取磷酸二氢钠克；磷酸氢二钠克

3、于一烧杯中，加蒸馏水毫升，搅拌溶解即可。(2)、样品溶液的配制：分别称取血红蛋白、核黄素各20.0毫克于一烧杯中，加磷酸缓冲液10.0毫升，搅拌溶解即可。五实验装置连接图实验装置的连接图实验装置的连接图1-恒流泵的进口端放入容器中，出口端与层析柱的进口端（上端）相连接。2-层析柱的出口（下端）与紫外检测仪比色管进口端（下端）相连接。3-紫外检测仪比色管出口端（上端）放入回收的容器中。4-紫外检测仪信号线路输出端与工作站采集器接收端相连接。5-采集器信号线路输出端与电脑进口端相连接。六实验操作步骤实验操作步骤1

4、、装柱[柱高：15cm]2、平衡[2-3倍柱床体积]3、上样[上样量：0.5ml]4、洗涤[用量：0.5ml，2次]5、洗脱[流速：0.5ml/分]6、收集[免]7、测定[色谱工作站]友情提醒（1）、在装柱的同时应接通各仪器电源进行预热，并按要求不断调试各仪器。（2）、在柱子平衡时，应将柱下端出口与紫外检测仪进口端相连接，由紫外检测仪出口端流出，并在此条件下，进行仪器零点调节。（3）、在开始上样之前，必须事先启动控制工作站的电脑。七面韶仪器的使用紫外检测仪和色谱工作站介绍思考题：1、凝胶过滤柱层析为什么也要预

5、先进行平衡，如果不平衡会产生何种结果？同学开始实验友情提醒：如果我未讲清楚的地方,请同学随时反问授课者,不必客气.