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1、小结名称原理电极缓冲液支持介质电泳形式加样方式染色液分辨率醋酸纤维素电泳琼脂糖凝胶电泳PAGEIEFSDS-PAGE层析CHROMATOGRAPHY一、概述1、定义层析(又名色谱)一种利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异，使各组分在层析两相中以不同程度分配，借此将各组分分离。分子极性分子大小分子形状离子亲和力分子亲和力吸附能力凝胶层析离子交换层析亲和层析2、物理化学性质间的差异吸附层析LL■层析分析法的基本原理：流动相Mobilephase固定相Stationaryphase样本分子依其分子极性选择亲和两相之一吸附层析分配层析Liquid-SolidLiquid-Liquid两相系统AB
2、C每次分离样本都要做一次选择OnePlateofSeparation(理论板数)S极性L非极性极性非极性样本样本1903年俄国植物学家茨维特发表了有关填充以菊根粉的玻璃柱分离植物色素，以石油醚冲洗，得到黄色、绿色区带;3、层析的发展1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素1941年，Martin和Synge提出分配色谱法1944年，Martin等又提出纸色谱法1952年，Martin和James发明了气液色谱法1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现代色谱分析的建立1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法(TLC)1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪，确定了核糖核
3、酸的分子结构1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色谱(high-performanceliquidchromatography,HPLC)仪1975年，Small等提出离子色谱20世纪80年代，超临界色谱20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Reŭss第一次电泳实验）21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备色谱可望取得更大的发展层析法进行时有两个相，一个相称为固定相，另一相称为流动相。支持物含待分离物质气相层析液相层析气-固气-液液-固液-液二.层析技术的分类1.按两相所处的状态分类以气体作为流动相以液体作为流动相2.按层析的机制可分为吸附层析adsorptionchr
4、omatography分配层析partitionchromatography凝胶层析gelchromatography亲和层析affinitychromatography离子交换层析ion-exchangechromatography定义指混合物随流动相通过吸附剂时，由于吸附剂对不同物质的吸附力而使混合物分离的方法原理在不同条件下，吸附剂与被吸附物之间的作用物理作用的范德华吸附：无选择性，吸附速度快，吸附的过程是可逆的化学吸附：由原子价力的作用引起。有选择性，吸附速度较慢，不易解吸（1）吸附层析在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡
5、，吸附层析就是不断地产生平衡与不平衡，吸附与解吸吸附层析常用的吸附剂硅胶碱性:碳氢化合物中性:醛,酮,醌,酯,内酯酸性:酸性色素,醛,酸聚酰胺氧化铝活性炭磷酸钙粉末:吸附力大,流速慢颗粒:吸附力中,流速易控锦纶-活性炭:吸附力弱锦纶66或锦纶6酰胺基团对酚,DNP-氨基酸,醌,羧酸氢键：羟基与羰基唯一用于生物活性物质羟基磷灰石（2）分配层析——利用不同组分在流动相和固定相中的分配系数不同而进行分离的方法。柱层析columchromatography进样量大且容易回收薄层层析thinlayperchromatography小量样品，快速，操作简便3.按制备量分类■层析法的演变过程：圆形滤纸长条
6、滤纸薄层层析(TLC)柱层析容量变大容量更大加展开液纸层析薄层层析三.层析的一般原理1.分配系数Partitioncoefficient表示一种物质在两种特定相（流动相和固定相）中分配程度溶质在固定相中的浓度CsK=————————————=——溶质在流动相中的浓度Cm特定的温度：常数K大：被固定相吸附的牢固，随流动相的移动速度较慢。纯化生物物质的纯度取决于混合物中各组分K值的差异程度混合物中各组分若K值相差较大,则能较易地把混合物中的生物物质分离。反之,K值相差较小,不易把混合物中的生物物质分离12345K=1K=0.132161681684121242812829010100118810
7、.12.724.372.90.010.364.8629.1665.61凝胶层析GelChromatography凝胶过滤（gelfiltration）(Porath,Flodin,1959)分子筛层析（molecularsievechromatography）(Hjertén,Mosbach,1962)排阻层析（exclusionchromatography）(Pedersen,1962)指混合物随流动相经固
