颅骨锁骨发育不全患者骨髓基质细胞的增殖、成骨和衰老.pdf

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1、·66·口腔生物医学2015年6月(第6卷第2期)OralBiomedicine，Vo1．6，No．2，Jun．2015[文章编号]1674—8603(2015)02-0066-05颅骨锁骨发育不全患者骨髓基质细胞的增殖、成骨和衰老张娟一，戈杰，李光南，周培培一，江宏兵。(1．南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室，江苏南京210029；2．南京医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，江苏南京210029)[摘要]目的：骨髓基质细胞(bonema~owstromalcells，BMSCs)在调节颅骨锁骨发育不全(cleidocranialdysplasia，CCD)患者骨结构中发挥关键作用，本研究

2、通过与正常BMSCs比较分析，探讨CCD患者BMSCs的体外增殖、成骨分化、干性及衰老特征。方法：分离培养CCD患者及正常同龄人BMSCs；甲基噻唑基四唑(MTT)法及流式细胞周期分析其增殖能力；成骨诱导后采用Westernblot及茜素红染色分析其成骨能力；检测多潜能转录因子及克隆形成，分析其干性能力；检测衰老调控关键基因p16、p21表达及通过B—gal衰老染色分析其衰老特征。结果：与正常BMSCs相比，BMSCs—CCD增殖活性低，且细胞周期中处于s期、G，的细胞比例较低；两组细胞成骨诱导l、3、7d后，BMSCs—CCD组中Runt相关转录因子2(Runt—relatedtranscr

3、iptionfactor2，Runx2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、骨桥蛋白(Osteopontin，Opn)表达水平较正常组低；成骨诱导14d后，BMSCs—CCD组形成的钙化结节较正常组少；BMSCs—CCD组中多潜能转录因子Oct4、Nanog、Sox2表达及克隆形成率均较正常组低；相反，BMSCs—CCD组中p16、p21等衰老标记分子表达及衰老细胞阳性染色比例均较正常组高。结论：同正常BMSCs比较，CCD患者BMSCs的增殖能力、成骨能力、干性强度均较差，且更易衰老。这些特征可能是CCD患者易发骨质疏松及骨折的生物学机制之一。[关键词]颅骨锁骨发育不全；骨髓基质细胞；成

4、骨；干性；衰老[中图分类号]R780．2[文献标识码]A[doi]10．3969／j．issn．1674—8603．2015．02．003Studyofproliferation，osteogenesisandsenescenceofbonemarrowstromalcellsfromacleidocranialdysplasiapatientZHANGJuan，G，LIGuangnan一，ZHOUPeipei，JIANGHongbing．(J．JiangsuKeyLaboratoryofOralDiseases，NanjingMedicalUniversity，Na，ng210029，Chi

5、na；2．DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery，AffiliatedHospitalofStomatology，NanfingMedicalUniversity，Nang210029，China)Correspondingauthor：J1ANGHongbing，Email：jhbcd@sina．corn，Tel：0086—25—85031914[Abstract]0bjective：Tostudytheinvitrobiologiccharacteristicsofbonemarrowstromalcellswithcleidocranialdysp

6、lasia(BM—SCs—CCD)，includingosteogenesis，proliferationability，sternnessandsenescence．Methods：MTTandcellcycledetectionforprolifera—tionability，Westernblotandalizarinredstainingforosteogenesisability，Westernblotandclony—formationforstemnessability，Westernblotandsenescencestainingforsenescencecharacteri

7、stics．Results：TheopticaldensityvaluewaslowerinBMSCs—CCDinMTTexperi—mentandlowerBMSCs—CCDwereunderSorG2stagewhilemoreunderG1stageincellcycledetection．BMSCs—CCDexpressedlowerlevelsofRunx2，Opn，Osterixand