邻苯二甲酸二乙基己酯长期暴露对鲤鱼酯酶同工酶的影响.pdf

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1、第39卷第11期西南师范大学学报(自然科学版)2014年11月Vo1．39No．11JournalofSouthwestChinaNormalUniversity(NaturalScienceEdition)Nov．2014邻苯二甲酸二乙基己酯长期暴露对鲤鱼酯酶同工酶的影响①张贵生菏泽学院生命科学系，山东菏泽274015摘要：用5，20，80，160mg／L的DEHP，以水和吐温80(聚梨山酯80)为对照，浸染鲤鱼20d，采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，研究了DEHP对鲤鱼肝、脑、鳃、肾酯酶同工酶表达的影响．结果表明：与水对照组相比，吐温

2、80组肝脏酯酶新增了一条酶带，鳃酯酶缺失了一条酶带，但吐温8O对鲤鱼脑、肾酯酶酶谱没有影响．与吐温80组相比，各DEHP处理组肝脏、肾脏酯酶酶带表现为缺失，但5mg／L组肝脏和2O，80，160mg／L组脑新增了一条酶带．4种组织酯酶同工酶的表达差异性明显，活性强弱依次为肝脏、肾脏、鳃、脑．各DEHP处理组肝、肾、鳃3种组织酯酶酶活性均低于相应吐温8O组，且160mg／L组4种组织酯酶酶活性均最低．关键词：邻苯二甲酸二乙基己酯；鲤鱼；酯酶同工酶中图分类号：Q959．468文献标志码：A文章编号：1000—5471(2014)11—0096—

3、05邻苯二甲酸二乙基己酯Cdi一(2-ethylhexy1)phthalate简称DEHP]为邻苯二甲酸酯类化合物(PAEs)中的重要一种，也是日常生活中使用最广泛的增塑剂．在塑料制品中，其含量可达50l_1j，但DEHP极易从塑料中释放出来，进入到水体、土壤、大气中，并能在生物体内富集，对环境和生物体造成损害，美国环境保护署(EPA)和我国环境检测总站都将其列为环境中优先控制的有机污染物．有研究表明，DEHP具生殖毒性[zl和发育毒性L3]，并影响抗氧化性能[]等．同工酶是指催化反应相同而结构及理化性质不同的酶分子类型，由基因直接控制和调

4、节_6]．有研究表明，当机体受病毒、有毒药物等侵染时，同工酶的表达就会发生变化_7]．鱼类的酯酶同工酶为单体酶，由染色体上不同基因或共显性等位基因译制，在酶的代谢及生物膜结构、功能方面发挥重要作用r8]，特别是能水解大量非生理存在的酯类化合物，包括某些药物，具有解毒作用．鲤鱼Cyprinuscarpio．【．是在我国分布最为广泛的鱼种之一，在长江、嘉陵江、人工湿地、自来水中均检出了DEHP的存在_9．因此，研究DEHP对鲤鱼不同组织酯酶同工酶的影响，对探讨DEHP的科学应用及对鱼类的毒性作用机制，寻找PAEs的生物标志物有重要意义．1材料与

5、方法1．1材料1．1．1实验动物鲤鱼，由山东省菏泽市牡丹区鱼苗养殖场提供，体质量为(71±6)g．染毒前在室温条件下驯养10d．每日上午饲喂饵料1次，2d换1次水，每次换去1／3水量，并用充氧机充氧．①收稿13期：2013—07—30基金项目：山东省自然科学基金资助项目(ZR2010CM046)；山东省十二五“动物生理生化与应用”重点实验室资助项目作者简介：张贵生(1972一)，男，山东定陶人，硕士，副教授，主要从事鱼类生态毒理研究．第11期张贵生：邻苯二甲酸二乙基己酯长期暴露对鲤鱼酯酶同工酶的影响971．1．2买验试剂及仪器DEHP、吐温

6、80(聚梨山酯80)、丙烯酰胺，二甲叉双丙烯酰胺，过硫酸铵、Q一醋酸萘酯，8一醋酸萘酯等均为国产分析纯．电泳槽、电泳仪(北京市六一仪器厂)，自制玻璃缸(120cmX80cmX60cm)等．1．2实验方法1．2．1实验动物的处理实验分为6组，自来水对照组(不添加吐温80及DEHP))，吐温8O对照组，5，20，80，160mg／LDE—HP组(吐温8O为助溶剂，吐温8O对照组及DEHP各处理组，吐温8O体积质量分数均为80mg／L，质量分数小于0．01)，每组放置驯养好的鲤鱼1O条，并设2个重复．染毒在同一规格玻璃缸内进行，溶氧(DO)不低于

7、5mg／L，水温为(20±1)℃，pH值为6．5～7．0，自然光照．每天早8点饲喂1次，投喂量为20min内摄食完毕，无剩余为标准(饲料由江苏先驱饲料科技有限公司提供，先大O4系列，淡水鱼2号料)，充氧机充氧，2天换水1次，每次换1／3水量，并清除多余的残饵，染毒20d．1．2．2取材及电泳染毒2Od(各组鱼均未见死亡，也未见鱼有异常行为)，每组随即取鲤鱼6尾，解剖，取肝、脑、鳃、肾，提取液为0．65的生理盐水，组织质量与提取液体积之比m(g)：v(mL)一1：5．玻璃匀浆器研磨，4℃，3000r／min离心20min，取上清．采用不连续聚

8、丙烯酰胺凝胶电泳方法，浓缩胶质量分数为3．1，分离胶质量分数为7．5％，每孑L点样1OL．浓缩胶时电压75V，分离胶时电压150V．酯酶染色参考张贵生_11]的方法．2结果与分析