抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究.pdf

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1、650ISSN1007—8738细胞j分子免疫学杂志(ChinJCel1MolImmuno1)2011，27(6·论著·文章编号：1007—8738(2011)06—0650—04抗血小板膜糖蛋白l1)单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究谷颖，季顺东，赵益明，沈飞，阮长耿(苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室，江苏苏州215006)Development．identificationandfunction[Keyw。]platelet；glyc0pe‘n№；mon0c

2、’a‘bod-assayof瑚nod伽alantibodyagainsty；V。nwillebdfacl0[摘要]目的：制备抗人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)单克隆抗体(mAb)，并进行生化鉴定与初步探讨其临床应用。方法：采用血小板免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞融GUYing，JIShun—dong，ZHAOYi—ming，SHENFei，合。经间接ELISA法筛选和克隆化培养，获得1株抗人GPIbRUANChang—gengmAb的杂交瘤细胞，纯化其腹水获得mAb；免疫双扩散鉴定J

3、iangsuInstituteofHematology，TheFirstAffiliatedHospitalof其抗体亚类；流式细胞术和免疫放射法鉴定其识别的抗原；SoochowUniversity，KeyLaboratoryofThrombosisandHemosta—ELISA法检测该抗体对血浆血管性血友病因子(vwF)的瑞斯sis，MinistryofHealth，Suzhou215006，China托霉素辅因子活性的影响。结果：成功制备了1株抗人GPIbmAb，命名为SZ一151。ELIS

4、A法测定其腹水效价为1：20000，[Abstract]AIM：Toprepareandidentifyamonoclonal免疫双扩散鉴定其为IgG1亚类。免疫放射法和流式细胞术antibody(mAb)againsthumanplateletglycoproteinIband检测结果证实SZ一151和mAbSZ-2识别同一抗原GPIb，且作makeltsapplication．METHODS：BALB／cmicewereim·munizedwithhumanplateletswashed，an

5、dthespleencells用位点不同。ELISA结果显示，SZ-151对瑞斯托霉素辅因子活性无抑制作用。结论：获得l株新的抗血小板膜糖蛋白Ibofthemwerefusedwithmylomacells．Ahybridomacellwas的mAb，可用于血浆vWF的瑞斯托霉素辅因子活性检测，为screenedbyindirectELISAandcloned．andthemAbwere血管性血友病的诊断和分型提供了有效的工具。purifiedfrOmtheascitesofmice．Igsubc

6、lasswasanalysed[关键词]血小板；糖蛋白Ib；单克隆抗体；血管性血友病因子bydoubleimmunodifusion．Theantigenrecognizedby[中图分类号]Q813．2[文献标识码]Bmonoclonalantibodywasidentifiedbyflowcytometryandradioimmunoassy，respectively．TheinhibitionofmAbon血小板膜糖蛋白(GP)Ib—IX—V复合物是血小板plasmavonWillebran

7、dfactorristocetincofactoractivity膜上的主要糖蛋白之一，在初期止血过程中具有重(vWF：Rcof)wasinvestigatedbyenzymelinkedJmmunosor-bentassay(ELISA)．RESULTS：AmurinemAbagainsthu-要功能。抗GPIb单克隆抗体(mAb)是研究血管性血manplateletmembraneglycoprotein(GP)Ibwasdevel—友病因子(yonwillebrandfactor，vwF)与

8、血小板的关opedanddenominatedasSZ-151．SZ-151belongedtoIgG1系、血栓性疾病的发病机制、病理状态下引起血栓形subclassanditstiterinasciteswas1：20o00．Flowcytome—成的作用的有效工具，也可用于出血性疾病的检测tryandradioimmunoassyshowedthattheantigenrecog-与诊断。我室于1986年通过杂交瘤技术制备的抗人nizedbymonoclonaIantibody