抗环瓜氨酸肽抗体检测的应用进展.pdf

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1、上海医学2009年第32卷第lO期·综述·抗环瓜氨酸肽抗体检测的应用进展王玉俊赵虎抗环瓜氨酸肽(cycliccitrullinatedpeptide，合适的人群；而且，采用间接免疫荧光法检测的精CCP)抗体是由类风湿关节炎(rheumatoid密度较差，故一直未被推广。arthritis，RA)患者B淋巴细胞分泌的特异性较高1998年Schellkens等和1999年Girbal—的抗体，其他疾病和正常人群的B淋巴细胞不分Neuhauser等]根据基因库中各序列号丝集蛋白泌抗CCP抗体[1]，2000年Schellekens等[2首先的氨基酸序列进行分析，合成了一条以瓜氨酸代将其用于

2、RA的检验诊断。RA是一种以关节滑替精氨酸的约20个氨基酸残基的肽链，并证实瓜膜炎为特征，以多发性关节炎为主要临床表现，进氨酸是RA患者血清中抗丝集蛋白相关抗体识别而导致关节畸形、功能障碍的常见致残性疾病，早的主要抗原决定簇成分。应用合成的瓜氨酸肽作期诊断至关重要。但是，目前的诊断均依据1987为基质，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)可自RA年美国风湿协会修订的RA分类诊断标准，其中早期患者的血清中检出抗瓜氨酸肽抗体，甚至在临床实验室诊断最常用的是检查血清中的类风湿临床症状出现前就可检测到[5]。但是，由于瓜氨因子(rheumatoidfactor，RF)，由于RF受某些抗酸肽的肽

3、链较短，在溶液中的构象欠稳定，影响抗原、抗体物质的干扰，常出现假阳性，特异性不高。体对肽的亲和力。因此，应用j3一转角构象的肽链抗CCP抗体的检测为RA的早期诊断提供了较好易与抗体结合的原理，形成了以环化肽模仿最初的血清学指标，但目前国内尚未广泛开展。本文对抗原决定簇J3～转角构象的研究理念，以提高其对抗CCP抗体检测的研究及临床应用作一综述。抗体的亲和力。2000年，Schelleken等以半胱氨酸替换由19个氨基酸残基组成瓜氨酸肽链中的21瓜氨酸相关自身免疫系统与CCP的合成个丝氨酸，形成与口一转角构象具有相似结构的二瓜氨酸相关自身免疫系统指RA患者血清中硫键，合成CCP。采用C

4、CP为抗原基质，采用的一些抗体在化学结构上具有相关性，即表位均ELISA法检测RA患者血清中的抗CCP抗体，为含有瓜氨酸¨3]，该系统在RA的早期诊断中发挥RA的早期免疫学诊断建立了有效方法。关键作用，抗CCP抗体就是其中重要的一种。瓜2CCP及其抗体在RA发病机制中的作用氨酸是人体中的稀有氨基酸，由精氨酸在转录后经酶修饰生成，仅存在于人类的少数几种蛋白中，正常条件下，巨噬细胞和中性粒细胞的核浆包括丝集蛋白、中间丝集蛋白。在细胞分化过程中含有PAD5_7]，但由于胞质中的Ca。浓度很低中，口腔黏膜上皮细胞角质颗粒中的丝集蛋白前(1×10。mol／L)，低于PAD活化所必需的体被酶分解

5、成丝集蛋白亚单位，同时，蛋白去磷酸1×10～mol／L，故PAD是无活性的]。在关节化，精氨酸在多肽精氨酸脱亚氨酶(peptidyl滑膜的自身免疫性炎症中。中性粒细胞等炎性细argininedeiminase，PAD)的催化下脱氨基而转化胞首先在细胞黏附分子的作用下，经历了翻滚、黏成瓜氨酸残基[4]，瓜氨酸残基是抗原决定簇的必附、渗出、浸润等过程，中性粒细胞、树突状细胞及要成分，能被RA血清特异性识别。但是，由于它巨噬细胞被激活，并产生多种炎性介质，如肿瘤坏以人的口腔黏膜上皮细胞为反应底物，不易选择死因子(TNF)、白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、生长因子(GFs)等，使滑膜红

6、肿及滑膜微血管系统基金项目：上海市闸北区科学技术委员会与卫生局联合资助项目(2006一般02)失衡，微循环紊乱促使大量炎性细胞进入滑膜腔，作者单位：200070上海市闸北中心医院检验科(王玉俊)；复还可导致缺氧甚至使滑膜组织微梗死。同时，纤旦大学附属华东医院检验科(赵虎)维蛋白原自微血管漏出，形成衬于血管外的纤维蛋白网。此外，微循环紊乱也可导致氧过剩，其后循环，最终导致关节的不可逆损伤。可见，CCP产生的活性氧也可造成自由基损伤，进而引起炎及其抗体在RA的发生、发展中发挥重要作用，性细胞死亡_8。在氧化应激和这些细胞坏死或凋这也决定了通过ELISA法定性或定量检测患者亡的过程中，可使

7、其PAD释放至细胞外，同时血清中的抗CCP抗体对RA的诊断具有重要Ca失去稳态，使细胞外Ca。一浓度增至意义。l×10～mol／I，可激活漏至细胞外的PAD[。同3检测抗CCP抗体的临床应用时，濒死细胞的膜通透性增高，高浓度Ca也可进入细胞内，激活细胞内的PAD。使PAD5活化为3．1抗CCP抗体是RA早期诊断较理想的检测指PAD2及PAD4_】。此时，均可检测到巨噬细胞标RA是致畸率高、后果严重、常见的自身免疫和中性粒细胞表达PAD。病，全世界约1的人群