抗谷胱甘肽-S-转移酶（GST）单克隆抗体的研制及初步应用.pdf

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1、●CT^HR／CUtlURAE华北农学报·2011，26(4)：82—85BOREILI—SIHICA抗谷胱甘肽·S一转移酶(GST)单克隆抗体的研制及初步应用滕蔓，罗俊，王秋霞，王丽，张改平(河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点开放实验室，河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州450002)摘要：以纯化的谷胱甘肽转移酶标签蛋白(GST)免疫Balb／C小鼠，取免疫鼠脾细胞与NSO骨髓瘤细胞按常规方法融合，用纯化的GST经间接ELISA筛选，阳性孑L经3次有限稀释法亚克隆，最终获得2株抗GST的单克隆杂交瘤细胞株，分别命名为

2、4B7一E4和4B7一F4。间接ELISA检测4B7一E4、4B7一F4细胞培养上清的效价分别为1：4000、1：3000，腹水效价分别为1：3×10。和1：2×10。Western—blot结果表明，这两株单抗均可以特异性地识别GST蛋白和带有GST标签的融合蛋白。关键词：GST；单克隆抗体；间接ELISA中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1000—7091(2011)O4—0082—04PreparationofMonocionalAntibodiesagainstGlutathione-S·transferas

3、e(GST)TENGMan，LUOJun，WANGQiu—xia，WANGLi，ZHANGGai—ping(KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture，HenanProvincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology，HenanAcademyofAgricuhuralSciences，Zhengzhou450002，China)Abstract：Themonoclonalantibodies(McAbs)againstGlut

4、athione—S—transferase(GST)werepreparedinthepresentwork．Balb／CmicewereimmunizedwithpurifiedGSTandthecellfusionwasperformedbystandardmeth—od．Thehybridomsecretingantibodiesweresubclonedthreetimesbylimitingdilution．Twohybridomas，whichwerenamedas4B7一E4or4B7·F4andsecrete

5、dMcAbsagainstGST，werepickedoutbyindirectELISA．TheELISAantibodytitersofcellculturesupernatantandasciteof4B7一E4and4B7一F4were1：4000or1：3000．and1：3×10or1：2×10respectively．Western—blotshowedthatthese．McAbscanspecificallyreactwithGSTandre—combinantGST．Keywords：GST；McAb；I

6、ndirectELISA使用基因融合表达系统在大肠杆菌中可以生产蛋白酶如Thrombin、FactorX等切除，以期获得表达大量可溶的、能正确折叠、有生物活性的蛋白质，因的外源蛋白。用GST融合表达系统表达外源基而这种方法越来越受到研究者们的欢迎，其中谷胱因时，对融合表达产物的检测和纯化非常重要，为甘肽s2转移酶(GST)融合系统就是经常使用的一此，本试验制备了抗GST的单克隆抗体，以期为种，已广泛用于外源基因的融合表达⋯。pGEX表GST融合蛋白的检测和纯化提供物质基础。达载体系统是将GST基因与目的基因相融合，其问l材料

7、和方法插入一蛋白酶切割位点，外源基因可插入pGEX质粒GST基因的3端酶切位点，表达载体在大肠杆菌1．1材料中表达的外源蛋白的N端含有GST片段，融合蛋白表达载体蛋白GST的载体菌pGEX一6p一1由河可用Glutathionesepharose4B以亲和层析的方法纯南省动物免疫学重点实验室保存，IPTG和低分子量化，融合蛋白中的GST可选用有特异氨基酸位点的的Marker购自TaKaRa公司，8～l2周龄Balb／C小收稿日期：2010—05—21基金项目：国家公益性行业(农业)科研专项经费资助(200803015)作者简

8、介：滕蔓(1977一)，女，河南周口人，助理研究员，主要从事动物疫病快速检测技术及产品研发。通讯作者：张改平(1960一)，男，河南内黄人，研究员，博士，中国工程院院士，主要从事动物免疫学及重大疫病快速检测技术研究。nCTI4期滕蔓等：抗谷胱甘肽．S-转移酶(GST)单克隆抗体的研制及初步