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《抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、96微生物学杂志2012年1月第32卷第1期JOURNALOFMICROBIOLOGYJan.2012Vo1.32No.1抗MRSA—PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立邹玖明,张爱平,李智山h(1.襄樊学院附属医院襄阳市中心医院检验科,湖北襄阳441021;2.襄阳市中心医院重症医学科,湖北襄阳441021)摘要制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球茼青霉素结合蛋白2a(MRSA.PBP2a)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立检测MRSA的乳胶凝集方法。采用体外诱导的方法制备PBP2a蛋白,胸部肌肉多点注射方式免疫6只
2、海蓝蛋鸡,水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,Westernblotting进行特异性分析,用提取的IgY抗体致敏聚苯乙烯乳胶,建立检测PBP2a的乳胶凝集方法。成功诱导并制备获得纯化的PBP2a蛋白,首次免疫后1月每枚鸡蛋提纯后可获得约48mgIgY抗体,Westernblotting结果显示IgY抗体能有效识别纯化的PBP2a蛋白;成功建立检测PBP2a的乳胶凝集法,敏感性达1mg/L。抗MRSA—PBP2a鸡卵黄抗体具有较高的敏感性和特异性,基于其建立的乳胶凝集检测方法具有较好的灵敏性。关键词青霉素结合蛋白2a;卵
3、黄免疫球蛋白;乳胶凝集中图分类号R446.5文献标识码B文章编号1005—7021(2012)O1—0096—04PreparationofChickenEggYolkAntibodiesagainstMRSA—PBP2aandtheEstablishmentofaEmulsionAgglutinationTestMethodZOUJiu.ming,ZHANGAi.ping,LIZhi.shan(1.Dept.ofLab.。Hosp.A.f~1.XiangfanCol1.,2.Dept.ofICUMed.,XmngyangCt
4、r.Hosp.Xiangyang441021)AbstractInordertopreparechickeneggyolkimmunoglobulin(IgY)againstmethieillinresistantStaphylococcusnⅡ一rel~penicillinbindingprotein2a(MRSA—PBP2a)andtoestablishaemulsionagglutinationtest(EAT)methodtode—tectMRSA.ThePBP2awaspreparedadoptinginductio
5、nvitrobyimmunizingsixseabluelayersintramuscularmulti—pointedinjectionontheirbreasts.AndtheIgYwasextractedwithwater—dilutionmethod;theproteincontentwasmeasuredbyBCAmethod,andanatyzedbyWesternblottingtoevaluatethespecificity:Polystyreneemulsionwassen-sitizedwiththeext
6、ractedIgYantibodytoestablishEATmethodtodetectPBP2a.TheresultsshowedthatthePBP2awasinducedsuccessfully.Approximately48mgIgYwasextracted,obtained,andpurifiedfromeacheggonemonthafterthefirstimmunization.TheresultsofWesternblottingdemonstratedthattheIgYantibodycouldbeef
7、ectivelyrecognizedPBP2a.ThesensitivityofthesuccessfullyestablishedPBP2aEATmethodwasashighas1mg/L.There—fore,chickeneggyolkimmunoglobulinIgYagainstMRSA·PBP2apossessedfairlyhighspecificityandsensitivity,andEATmethodbasedonitpossessedfinesensitivity.Keywordspenicillinb
8、indingprotein2a;eggyolkimmunoglobulin;emulsionagglutination鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,物学特性等方面已研究得较清楚,并且作为诊断IgY)是鸡血液中IgG抗体选择性转移到卵黄中形试剂和
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